雞腸Remak神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)及其遞質(zhì)的研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物的腸神經(jīng)系統(tǒng)(ENS)分布在腸壁中，是自主神經(jīng)系統(tǒng)的第三個(gè)組成部分，能獨(dú)立完成各種反射活動(dòng)。與哺乳動(dòng)物不同，禽類由于有腸Remak神經(jīng)(INR)的存在，其ENS不僅包括腸壁內(nèi)的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，還包括腸壁外的INR。INR由薦部神經(jīng)嵴細(xì)胞衍生遷移而來，是禽類特有的一根在背腸系膜底緣中與腸管平行分布，從泄殖腔一直延伸到十二指腸的自主神經(jīng)節(jié)鏈，并發(fā)出許多神經(jīng)分支支配到腸管壁、泄殖腔、法氏囊、睪丸、卵巢和榆卵管。本文應(yīng)用電鏡技術(shù)、免疫組織化學(xué)

2、和原位雜交的方法，從不同角度對雞INR的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。 試驗(yàn)I.NR的超微結(jié)構(gòu)研究本試驗(yàn)用戊二醛對INR進(jìn)行固定，然后用透射電鏡系統(tǒng)觀察了雞INR的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。結(jié)果顯示空回腸段和直腸段INR中的超微結(jié)構(gòu)基本相似。在INR神經(jīng)節(jié)中分布有大量的神經(jīng)元，這些神經(jīng)元的輪廓呈不規(guī)則狀，每個(gè)神經(jīng)元有一個(gè)核，核表面光滑或有不同程度的溝壑，核中染色質(zhì)稀少。神經(jīng)元胞質(zhì)中有各種細(xì)胞器的存在，部分神經(jīng)元胞質(zhì)中有大量平行層

3、疊排列的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。在胞質(zhì)中有中空狀的分泌顆粒。神經(jīng)節(jié)中的衛(wèi)星細(xì)胞分布在神經(jīng)元細(xì)胞的周圍，比神經(jīng)元小，核形狀不規(guī)則，占據(jù)細(xì)胞的最大面積，其中的染色質(zhì)多且邊緣染色質(zhì)濃密。神經(jīng)元和衛(wèi)星細(xì)胞外包基底膜。在神經(jīng)節(jié)中，有許多連續(xù)型的毛細(xì)血管和少量的漿細(xì)胞。神經(jīng)節(jié)中的突觸可根據(jù)其基本結(jié)構(gòu)分為Gray Ⅰ型突觸和GrayⅡ型突觸。而軸突曲張?bào)w和神經(jīng)末梢根據(jù)其中含有不同的突觸囊泡可分為三種，一種是含有大量小清亮突觸囊泡(SSV)和極少數(shù)含致密核芯顆粒的

4、大顆粒囊泡(LGV)；第二種是其中含有SSV和LGV，二者的數(shù)量相當(dāng)；第三種是其中含有大量的線粒體和或多或少的突觸囊泡。在INR的節(jié)間束中有大量的無髓神經(jīng)纖維和少數(shù)有髓神經(jīng)纖維存在，在有髓神經(jīng)纖維外周，施旺氏細(xì)胞形成的髓鞘清晰可見。從橫斷面觀察，可見一個(gè)施旺氏細(xì)胞在形成一根有髓神經(jīng)纖維髓鞘的同時(shí)還包裹了多根無髓神經(jīng)纖維。這些超微結(jié)構(gòu)說明雞INR具有許多特殊性，可能與其復(fù)雜的調(diào)節(jié)功能有關(guān)。 試驗(yàn)Ⅱ.膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶和多巴胺羥化酶在雞

5、INR中的分布堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)和多巴胺羥化酶(D β H)分別是乙酰膽堿和去甲腎上腺素的標(biāo)志酶。本試驗(yàn)以ChAT作為副交感節(jié)后神經(jīng)元的標(biāo)志酶，D β H作為交感節(jié)后神經(jīng)元的標(biāo)志酶，應(yīng)用SABC法免疫組織化學(xué)技術(shù)，研究ChAT和D β H在雞INR內(nèi)的分布，以確定交感和副交感節(jié)后神經(jīng)元在INR中的分布，并確定各自所占的比例。研究發(fā)現(xiàn)，INR內(nèi)ChAT陽性神經(jīng)元占總神經(jīng)元數(shù)量的51.74±9.00％，D β H陽性神經(jīng)元占36.21

6、±8.81％。兩種神經(jīng)元胞體或?yàn)槎嗤黄鸬亩噙呅危驗(yàn)橐欢擞虚L突起的橢圓形，它們分布于神經(jīng)節(jié)內(nèi)的神經(jīng)纖維之間。D β H神經(jīng)元在節(jié)間束也有個(gè)別分布。部分神經(jīng)纖維也呈ChAT或D β H陽性。這表明雞INR內(nèi)既有副交感節(jié)后神經(jīng)元，又含有交感節(jié)后神經(jīng)元，且各自的成份分別約為52％和36％。 試驗(yàn)Ⅲ.雞血管活性腸肽RNA探針的制備及其mRNA在雞INR中的分布本試驗(yàn)應(yīng)用RT-PCR方法從雞腦中擴(kuò)增血管活性腸肽(VIP)的基因片段，將其連

7、接于pGM-T Easy。分別利用pGM-T Easy中T7和SP6的RNA聚合酶的啟動(dòng)子及RNA聚合酶，以線性化的VIP/pGM-T Easy為模板在體外轉(zhuǎn)錄合成正、反義DIG標(biāo)記RNA探針。通過原位雜交方法將合成的探針用于探查VIPmRNA在雞INR中的分布情況。結(jié)果表明，INR中大部分神經(jīng)細(xì)胞中有VIPmRNA的轉(zhuǎn)錄，其中VIP探針雜交陽性細(xì)胞在空回腸段和直腸段INR分別占74.71±12.02％和86.60±9.63％。原位雜交

8、陽性神經(jīng)細(xì)胞胞體呈梭形或橢圓形，其縱軸與INR延伸的方向平行；陽性神經(jīng)元胞體在INR神經(jīng)節(jié)中呈層狀或成群分布。在節(jié)間束也有少量的陽性細(xì)胞分布。本文從基因水平證明INR中有大量VIP神經(jīng)元，并可能作為外源性VIP能神經(jīng)纖維支配到腸壁和輸卵管等其它腹腔器官。 試驗(yàn)Ⅳ.雞生長抑素前體蛋白1RNA探針的制備及其mRNA在雞INR中的分布本試驗(yàn)應(yīng)用體外轉(zhuǎn)錄的方法合成正、反義地高辛標(biāo)記生長抑素前體蛋白1(PSS1)的RNA探針。通過原位雜交

9、方法將合成的探針用于探查PSS1 mRNA在雞空回腸段和直腸段INR中的分布情況。結(jié)果表明，INR中大部分神經(jīng)細(xì)胞中有PSS1的mRNA轉(zhuǎn)錄，其中PSS1探針雜交陽性細(xì)胞在空回腸段和直腸段INR分別占86.98±7.93％和86.07±6.11％。原位雜交陽性神經(jīng)細(xì)胞胞體呈有突起的梭形或橢圓形，其縱軸與INR延伸的方向平行；陽性神經(jīng)細(xì)胞胞體在INR神經(jīng)節(jié)中呈層狀或成群分布。在節(jié)間束也有少量的陽性細(xì)胞分布。本文從基因水平證明INR中大量神

10、經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行PSS1的mRNA的轉(zhuǎn)錄，并可能作為外源性生長抑素1能神經(jīng)纖維支配到腸壁和輸卵管等其它腹腔器官。 試驗(yàn)Ⅴ.雞前腦啡肽原RNA探針的制備及其mRNA在雞INR中的分布本試驗(yàn)同樣應(yīng)用體外轉(zhuǎn)錄的方法合成正、反義地高辛標(biāo)記前腦啡肽原(PPE)的RNA探針。通過原位雜交方法將合成的探針用于探查PPE mRNA在雞空回腸段和直腸段INR中的分布情況。 結(jié)果表明，INR中大部分神經(jīng)細(xì)胞中有PPE的mRNA轉(zhuǎn)錄，其中PPE探針

11、雜交陽性細(xì)胞在空回腸段和直腸段INR分別占83.79±7.96％和96.04±4.53％。原位雜交陽性神經(jīng)細(xì)胞胞體呈有突起的梭形或橢圓形，其縱軸與INR延伸的方向平行；陽性神經(jīng)細(xì)胞胞體在INR神經(jīng)節(jié)中呈層狀或成群分布。在節(jié)間束也有少量的陽性細(xì)胞分布。本文從基因水平證明INR中大量神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行PPE的mRNA轉(zhuǎn)錄，并可能作為外源性腦啡肽能神經(jīng)纖維支配到腸壁和輸卵管等其它腹腔器官。結(jié)合試驗(yàn)Ⅳ和Ⅴ的研究結(jié)果，在整個(gè)INR中都可能有VIP、PP