機(jī)械性后處理與自由基清除劑藥物后處理對(duì)急性缺血再灌注心肌保護(hù)作用的對(duì)照實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、急性冠脈綜合征是目前臨床上心血管領(lǐng)域發(fā)生率最高、最為兇險(xiǎn)、猝死率最高的急癥，其主要病因是持續(xù)性的心肌缺血導(dǎo)致細(xì)胞死亡和心肌組織損傷壞死，此時(shí)，進(jìn)行有效的再灌注是挽救心肌細(xì)胞最有效的方法。但再灌注處理也可加重心肌損傷，即再灌注損傷。急性缺血-再灌注損傷的防治及機(jī)制的研究一直是急性心肌缺血再灌注治療研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)課題。近年來國(guó)外學(xué)者提出了缺血后處理這一新的心肌保護(hù)概念，是指在長(zhǎng)時(shí)間心肌缺血后、在恢復(fù)完全再灌注之前，進(jìn)行數(shù)次短暫重復(fù)的心肌缺

2、血/再灌注的處理，有可能減輕心肌組織的再灌注損傷。與缺血預(yù)處理相比，缺血后處理在實(shí)施上有更好的可預(yù)測(cè)性及(臨床)可控性，因此具有較好的臨床應(yīng)用前景。部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和小樣本臨床研究已初步顯示出一定的正性結(jié)果。 藥物后處理是指在急性缺血后、完全再灌注之前使用模擬內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制的藥物，來發(fā)揮缺血后處理的保護(hù)作用。依達(dá)拉奉是一種新型自由基清除劑，動(dòng)物腦缺血再灌注實(shí)驗(yàn)顯示它能高效清除病變部位的各種氧自由基，減輕腦缺血再灌注損傷，臨床上用于治

3、療急性腦梗死的患者取得一定臨床療效。因此理論上依達(dá)拉奉用于急性缺血再灌注的心肌保護(hù)具有很大潛力。 本研究旨在探討動(dòng)物在體情況下，冠狀動(dòng)脈再灌注前，分別經(jīng)主動(dòng)脈根部(模擬經(jīng)冠脈)和股靜脈途徑給予注射依達(dá)拉奉進(jìn)行藥物后處理，與機(jī)械性缺血后處理相對(duì)照，觀察依達(dá)拉奉對(duì)大鼠心肌急性缺血/再灌注損傷的影響，并探討其機(jī)制，并通過兩種給藥途徑的對(duì)比，明確更好的給藥方法，為臨床尋找缺血再灌注心肌保護(hù)的后處理方法提供理論參考，主要技術(shù)路線、實(shí)驗(yàn)方法

4、與結(jié)果如下： 1．與機(jī)械性缺血后處理相對(duì)照，探討新型自由基清除劑依達(dá)拉奉進(jìn)行藥物后處理是否具有減輕急性心肌缺血再灌注損傷的作用，并探討其病理生理學(xué)機(jī)制。方法為：阻斷大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支血流45分鐘造成缺血，3小時(shí)再灌注建立急性心肌缺血再灌注模型。所有動(dòng)物隨機(jī)分為：假手術(shù)組；標(biāo)準(zhǔn)缺血再灌注組；機(jī)械性缺血后處理組；依達(dá)拉奉主動(dòng)脈根部-冠脈途徑給藥組；依達(dá)拉奉股靜脈途徑給藥組。描記術(shù)中心電圖變化，于再灌注末檢測(cè)血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，測(cè)定血漿

5、肌酸激酶同功酶(CK-MB)及血漿和心肌組織勻漿的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及一氧化氮(NO)，采用伊文思藍(lán)和三苯基氯化四氮唑(TTC)染色的方法確定梗死以及缺血的心肌范圍。結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)缺血再灌注組相比，機(jī)械后處理組、依達(dá)拉奉動(dòng)脈給藥組的心肌梗死范圍顯著減少，血漿CK-MB、血漿和組織勻漿MDA的水平顯著降低(p＜0.01)，NO的水平降低、SOD活力增加(p＜0.05)，靜脈給藥組與缺血再灌注組相比，心肌梗死范圍減少

6、，CK-MB、MDA水平降低，SOD活力增加(p＜0.05)；但上述主要參數(shù)在三個(gè)不同的后處理組的組間比較未顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異(p＞0.05)。 2．采用免疫印跡方法檢測(cè)心肌組織中bax、bcl-2、caspase-8的表達(dá)，從而從凋亡信號(hào)機(jī)制探討機(jī)械性缺血后處理與藥物后處理的分子生物學(xué)機(jī)制。分別取假手術(shù)組、缺血再灌注組、機(jī)械性缺血后處理組、依達(dá)拉奉藥物后處理(主動(dòng)脈根部給藥)組4組心肌組織蛋白提取液上清進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電

7、泳，分別使用3種蛋白的特異性抗體進(jìn)行Western blot免疫印跡檢測(cè)，采用Image-proplus軟件分析蛋白條帶的積分光密度IOD值，以靶蛋白IOD值/β-actin IOD值的比值反映靶蛋白相對(duì)水平。結(jié)果顯示：缺血再灌注誘導(dǎo)Bax、caspase-8表達(dá)明顯增多，Bcl-2表達(dá)明顯降低，(P＜0.01)；與標(biāo)準(zhǔn)再灌注組相比，機(jī)械性缺血后處理組、依達(dá)拉奉藥物后處理組，均可抑制再灌注心肌Caspase-8及促凋亡蛋白Bax的高表達(dá)

8、，并升高抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平(p＜0.05)，依達(dá)拉奉藥物后處理可顯著下調(diào)Bax/Bcl-2比值(p＜0.01)。 本研究結(jié)果初步顯示：對(duì)于大鼠急性缺血的心肌，再灌注之前經(jīng)主動(dòng)脈根部-冠脈注射途徑給予強(qiáng)自由基清除劑依達(dá)拉奉進(jìn)行藥物后處理，可顯著減輕心肌缺血再灌注損傷，產(chǎn)生與機(jī)械性缺血后處理相似的保護(hù)效應(yīng)。有效清除活性氧自由基、提高心肌組織的抗氧化應(yīng)激的能力是二者的共同作用機(jī)制。抑制caspase級(jí)聯(lián)途徑、下調(diào)凋亡指數(shù)(