基于細(xì)胞水平的葉酸復(fù)合物靶向腫瘤效果評價.pdf

1、y773069旦欠學(xué)。學(xué)校代碼：10246學(xué)號：022103125碩士學(xué)位論文基于細(xì)胞水平的葉酸復(fù)合物靶向腫瘤效果評價院系(所)：專業(yè)：姓藥學(xué)院藥劑學(xué)指導(dǎo)教師：完成日期：陸偉躍教授2005年5月朱噬疼≯急勿壘《公伍中文摘要基于細(xì)胞水平的葉酸復(fù)合物靶向腫瘤效果評價摘要葉酸受體是一種糖基化磷脂酰肌醇連接的膜糖蛋白，對葉酸及其類似物有高度的親和力和親合常數(shù)及免疫決定簇，分子量為38—44KDa。FR較均勻散布于細(xì)胞膜表面，結(jié)合葉酸后，在誘導(dǎo)劑

2、作用下形成被膜小凹(coatedpits)或凹穴(coveolae)內(nèi)集束，隨之發(fā)生細(xì)胞內(nèi)吞，將葉酸傳輸至胞內(nèi)。受體介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑是指配體與細(xì)胞膜表面受體專一性結(jié)合并被內(nèi)化的過程。首先，配體與其靶細(xì)胞特異的膜表面受體結(jié)合，并富集在靶細(xì)胞特定區(qū)域(包涵體被膜小凹處)，該區(qū)域向胞漿內(nèi)陷形成胞內(nèi)體，在酸性(pH5O～55)胞內(nèi)體中受體與配體分離，受體返回細(xì)胞膜表面，而內(nèi)化的配體或被溶酶體降解，或由此釋放入胞漿。與多數(shù)受體一樣，葉酸受體與其配體

3、的結(jié)合具有飽和性、可逆性和競爭性，一般結(jié)合速度快，解離速度慢。本研究的主要目的在于，從細(xì)胞水平探討并確立葉酸復(fù)合物的靶向腫瘤效果，為葉酸受體介導(dǎo)的抗腫瘤藥物的后續(xù)研究提供實驗基礎(chǔ)。本研究的主要內(nèi)容包括：評價葉酸復(fù)合物靶向能力的細(xì)胞模型建立；葉酸復(fù)合物與腫瘤細(xì)胞特異性結(jié)合評價；葉酸脂質(zhì)體抗腫瘤活性的細(xì)胞學(xué)水平評價；飼料中葉酸含量對動物生長和葉酸復(fù)合物腫瘤靶向性影響的評價。集落形成法考察不同葉酸濃度培養(yǎng)液對細(xì)胞生長影響的試驗結(jié)果表明，在一定

4、濃度范圍內(nèi)，兩種細(xì)胞的集落形成率都隨培養(yǎng)液中葉酸濃度的增加而急劇增加，當(dāng)葉酸濃度達(dá)到56638nmol／L逐漸趨于飽和。使用人體生理條件下葉酸濃度的培養(yǎng)液時，集落形成率約為50％左右，并不影像細(xì)胞維持正常生理功能。普通培養(yǎng)液中葉酸對腫瘤細(xì)胞特異攝取葉酸復(fù)合物的影響試驗結(jié)果表明，普通RPMll640培養(yǎng)基中大量的游離葉酸可與葉酸復(fù)合物競爭腫瘤細(xì)胞表面的葉酸受體，從而抑制了細(xì)胞對葉酸復(fù)合物的攝取。因此，在后續(xù)的葉酸復(fù)合物的體內(nèi)外靶向及藥效學(xué)

5、研究中將使用無葉酸RPMll640作為培養(yǎng)基。通過放射性配基受體結(jié)合分析法測定了三種人體腫瘤細(xì)胞株的葉酸受體，從而篩選出富含葉酸受體的KB細(xì)胞和SGC7901細(xì)胞，后續(xù)的研究將圍繞這兩株細(xì)胞展開。其中，國內(nèi)建株的胃腺癌SGC7901細(xì)胞表面高度表達(dá)葉酸受體，與國外普遍報道的KB細(xì)胞的葉酸受體數(shù)量近乎一致，為葉酸受體介導(dǎo)的胃癌治療藥物的研發(fā)奠定了實驗基礎(chǔ)，具有潛在的臨床實用意義。F1TC標(biāo)記后并不影響葉酸復(fù)合物本身的生物活性，F(xiàn)—EDA—