輔酶復(fù)合物原料藥的提取工藝研究.pdf

1、輔酶是人體物質(zhì)代謝中重要而不可缺少的輔助因子。輔酶復(fù)合物因富含多種活性成分(輔酶A、輔酶I、GSH、ATP等)及其相互間的協(xié)同增效功能，而對(duì)機(jī)體的新陳代謝、蛋白質(zhì)合成、組織及生理功能的動(dòng)態(tài)平衡等具有重要的促進(jìn)作用，是臨床上治療急慢性肝炎、原發(fā)性血小板減少性紫癜、冠狀動(dòng)脈硬化、腎功能不全等疾病的重要輔助藥物。有關(guān)輔酶復(fù)合物的提取工藝國(guó)內(nèi)外少有報(bào)道。本文從工業(yè)化生產(chǎn)輔酶復(fù)合物的角度出發(fā)，以成本低廉的酵母為原料，輔酶單體的生產(chǎn)工藝為基礎(chǔ)，進(jìn)行

2、了提取工藝的篩選和研究。 論文首先對(duì)酵母細(xì)胞的破壁方法進(jìn)行了比較研究，得出溫差破壁法為生產(chǎn)輔酶復(fù)合物的最佳破壁工藝。經(jīng)正交試驗(yàn)顯示，其最優(yōu)化的工藝條件是料液比3，保溫溫度90℃，保溫時(shí)間5 min。破壁后輔酶復(fù)合物的得率達(dá)到了39％。 在對(duì)破壁液分離步驟的研究中，分析比較了輔酶單體成分常用的活性炭吸附層析及超濾分離技術(shù)，確定了采用超濾技術(shù)代替活性炭層析，其所得結(jié)果不但避免了后者的堿性洗脫液對(duì)輔酶活性的破壞，而且提高了整個(gè)

3、工藝的分離效率，使工藝流程更為簡(jiǎn)潔、流暢。經(jīng)過(guò)對(duì)D85＃、D315#、717#、732#等四種離子交換樹(shù)脂分離純化能力的比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示717#樹(shù)脂對(duì)輔酶復(fù)合物的吸附能力、分離效果最好，并通過(guò)對(duì)該樹(shù)脂的分級(jí)洗脫試驗(yàn)和最佳洗脫條件的摸索，確定了能使輔酶復(fù)合物一步洗脫分離的洗脫體系(洗脫液濃度為0.2 mol/L NaCl-0.02 mol/LHCl)，從而有效地保證了各活性成分的相對(duì)穩(wěn)定性，更好地發(fā)揮復(fù)方制劑的協(xié)同增效作用。 輔

4、酶復(fù)合物的提取工藝流程(工藝流程-3)為酵母原料→溫差破壁→超濾提取→樹(shù)脂層析→濃縮→丙酮沉淀→原料藥。本工藝具有穩(wěn)定性好、產(chǎn)品得率高、操作簡(jiǎn)單，適于工廠生產(chǎn)所要求的無(wú)縫式、連續(xù)化、自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。利用本工藝制得的原料藥中輔酶A、輔酶I純度分別為1.7861 u/mg、1.765μg/mg、純度比值為1.01，原料藥總得率為3.35％、理論制劑得率為112支/200 g干酵母投料，完全達(dá)到或優(yōu)于規(guī)定的技術(shù)指標(biāo)，其余指標(biāo)也都符合國(guó)家藥品