LPS致家兔發(fā)熱誘導(dǎo)的HSF1聚合對體溫及腦內(nèi)AVP含量的影響.pdf

1、恒溫動物和人在發(fā)熱時體溫很少超過一定限度，例如，人體體溫很少超過41℃，稱為熱限現(xiàn)象，提示體內(nèi)存在著調(diào)控體溫的自限機構(gòu)，但其機制尚不十分清楚。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)作為外源性致熱原可致體溫升高。精氨酸加壓素(arginine vasopressin，AVP)是一種內(nèi)源性解熱物質(zhì)，主要作用于腹側(cè)中隔區(qū)(vent ral septal area，VSA)。有報道向VSA注射AVP能顯著地抑制家兔的內(nèi)毒素(en

2、dotoxin，ET)性發(fā)熱反應(yīng)。 熱休克因子(Heat shock transcription factor，HSF)是一組結(jié)構(gòu)和功能具有廣泛同源性，普遍存在于真核生物細胞中的核蛋白，包括HSF1、HSF2、HSF3、HSF4。其中HSF1對溫度刺激敏感，被激活時由單體結(jié)合成三聚體，具有調(diào)節(jié)熱休克蛋白(Heat shock protein，HSP)及多種生物活性物質(zhì)轉(zhuǎn)錄的功能。本研究室以往的研究結(jié)果顯示，HSF1能夠抑制單核細

3、胞內(nèi)生性致熱原的產(chǎn)生及中樞發(fā)熱介質(zhì)的產(chǎn)生。但是HSF1的激活是否能夠調(diào)控中樞AVP的水平，進而，AVP發(fā)揮對體溫的負調(diào)節(jié)作用，相關(guān)的研究還未見報道。 本實驗通過復(fù)制家兔LPS發(fā)熱模型，觀察發(fā)熱誘導(dǎo)的HSF1聚合對發(fā)熱過程及腦內(nèi)AVP含量的影響，并通過中樞給予槲皮素(quercetin，QCT)抑制HSF1的活化，旨在進一步探討發(fā)熱時HSF1限控體溫的相關(guān)中樞調(diào)節(jié)機制。 材料與方法 1、動物分組、模型及標(biāo)本制備

4、 (1)動物分組健康雄性新西蘭白兔70只，隨機分為四組：正常對照組(N)、槲皮素組(Q)、脂多糖組(L)和槲皮素+脂多糖組(Q+L)。 (2)腦室插管在應(yīng)用1％戊巴比妥鈉(3ml/kg)靜脈麻醉下，將動物固定在SN-2型腦立體定位儀上。按Sawyer氏兔腦圖譜，在P1L4-5H5(側(cè)腦室)處埋藏一外徑為1 mm的塑料管，用牙科水泥固定，術(shù)后將管端中封閉。術(shù)后家兔單籠飼養(yǎng)，常規(guī)喂養(yǎng)1 wk后進行實驗。 (3)復(fù)制發(fā)熱模

5、型用無熱原的生理鹽水將精制的大腸桿菌內(nèi)毒素-LPS稀釋成0.5μg/ml，按1μg/kg體重，經(jīng)家兔耳緣靜脈注射。 (4)取材N組和Q組于測溫后60 min處死家兔，其它兩組分別在給予LPS后0、30、60、180、240和360 min時處死家兔，迅速取出家兔下丘腦及腹中隔區(qū)，取一部分放入生理鹽水中，煮沸5 min。制備組織勻漿，離心后取上清置-20℃保存待進行AVP含量的測定；另取一部分迅速放入液氮中，20 min后置-70

6、℃深度冰箱中保存，待進行HSF1和HSP70表達量的測定。 2、檢測指標(biāo) 實時監(jiān)測體溫的變化，體溫變化情況采用AT，TRI進行分析；應(yīng)用Western印跡法檢測不同實驗條件下下丘腦HSF1和HSP70的表達；用放射免疫法檢測下丘腦及腹中隔區(qū)AVP含量的變化。 3、數(shù)據(jù)分析 所有實驗數(shù)據(jù)均用均數(shù)士標(biāo)準差(x±s)表示，采用SPSS11.0軟件統(tǒng)計分析，相關(guān)分析用相關(guān)性檢驗分析法。 實驗結(jié)果

7、1、家兔的體溫變化家兔靜脈注射LPS(1μg/kg)后引起雙峰熱。即60 min時體溫上升形成第一個高峰，體溫變化值為1.32±0.24℃。在180 min時，體溫上升形成第二個高峰，體溫變化值為1.84±0.35℃。各組體溫變化最大值(ATmax)由低至高順序為：Q組

8、、下丘腦及VSA中AVP的含量變化各組VSA中的AVP含量均呈現(xiàn)隨發(fā)熱幅度增大而增加，二者之間呈明顯的正相關(guān)(r=0.913，P<0.01)。Q+L組與L組比較，VSA中的AVP含量顯著增高(240～360 min)(P<0.05)，但下丘腦中AVP的含量均無顯著變化(P>0.05)。 3、下丘腦及腹中隔區(qū)HSF1和HSP70的表達在LPS致熱過程中，可見從給予LPS后60 min(△T：1.32±0.24℃)起HSF1三聚體的

9、表達顯著增高，達到體溫最高值后隨著HSF1三聚體的表達水平的進一步升高，體溫逐漸下降。在各組HSF1的總體含量無顯著變化。應(yīng)用QCT可顯著地抑制HSF1的聚合，同時可見HSP70表達水平相應(yīng)降低。 4、HSF1三聚體含量與體溫及AVP含量變化的相關(guān)性分析LPS致發(fā)熱過程中，在達到體溫高峰以后(180～360 min)，下丘腦中HSF1三聚體的含量與體溫變化呈負相關(guān)(r=-0.897，P<0.01)；與VSA中的AVP含量也呈負相