HSF1對Dp71表達的調(diào)控研究.pdf

1、Dp71是抗肌萎縮蛋白(dystrophin)基因家族在諸多組織均有表達的一個具有多種功能的同源異構(gòu)體蛋白。近年來的一系列研究表明:該蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，神經(jīng)系統(tǒng)功能的維護以及神經(jīng)細胞的黏附和增殖過程起著重要的作用。作為介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)中熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)產(chǎn)生的重要轉(zhuǎn)錄因子，熱休克因子1(heatshock factor1，HSF1)還能通過結(jié)合其他基因（如iNOS、Fas）啟動子區(qū)的HSE影響

2、其mRNA和蛋白水平表達來發(fā)揮其他生物學(xué)功能。生物信息學(xué)軟件分析發(fā)現(xiàn)小鼠和人的Dp71啟動子區(qū)含有一個熱休克元件(HSE)，表明Dp71的表達可能受到HSF1的調(diào)控。本課題主要是研究HSF1對Dp71基因的表達的影響，從而探討Dp71作為HSF1可能的下游調(diào)節(jié)產(chǎn)物，最終導(dǎo)致HSF1基因敲除小鼠產(chǎn)生一系列神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。
　　本課題主要采取以下方法:1、取野生型小鼠和HSF1敲除小鼠的大腦、肺、肝臟、腎臟、脾臟等組織，提取蛋白和mRN

3、A做Western-blot和Real time RT-PCR，在整體動物上檢測HSF1敲除對DP71在非肌肉組織中表達水平的影響;2、人肺癌A549細胞轉(zhuǎn)染HSF1真核表達質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒，Western-blot和Real time RT-PCR檢測細胞中HSF1表達的上調(diào)或下調(diào)對DP71的mRNA和蛋白表達水平的影響;3、EMSA和雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)從分子水平驗證HSF1與Dp71基因啟動子區(qū)HSE的結(jié)合。
　　結(jié)果顯示:

4、(1)和野生型小鼠相比，HSF1敲除小鼠非肌肉組織中Dp71的mRNA和蛋白表達水平下降，其中腦組織和肺組織中表達有差異，其差值具有統(tǒng)計學(xué)意義;(2) A549細胞中轉(zhuǎn)染HSF1真核表達質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒明顯升高和降低A549細胞Dp71的mRNA和蛋白表達水平(3) EMSA和熒光素酶報告基因證實HSF1能與Dp71基因啟動子區(qū)的HSE直接結(jié)合。以上結(jié)果表明:整體動物中HSF1缺失可使Dp71在非肌肉組織中表達降低;HSF1過表達和表達抑