納洛酮對IL-1β致熱大鼠體溫及下丘腦中cAMP和HSP70含量的影響.pdf

1、發(fā)熱是臨床疾病常見的一種伴隨癥狀。一些細(xì)胞因子參與誘發(fā)產(chǎn)熱和引起發(fā)熱。白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)是目前公認(rèn)的一種內(nèi)生致熱原，許多實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明腦室內(nèi)給予IL-1β能引起動(dòng)物發(fā)熱反應(yīng)。 近些年來許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)，阿片系統(tǒng)參與介導(dǎo)內(nèi)生致熱原的發(fā)熱效應(yīng)。預(yù)先中樞或外周給予阿片受體拮抗劑，能夠減弱甚至完全阻斷由IL-1β，腫瘤壞死因子(tumurnecrosisfactor，TNF)，干擾素(interfer

2、on，IFN)、白細(xì)胞介素-6(interliukin-6，IL-6)等引起的發(fā)熱效應(yīng)。納洛酮(Naloxone，Nal)是一種非特異性阿片受體拮抗劑，對機(jī)體各型阿片受體均有拮抗作用而無激動(dòng)活性。 環(huán)磷酸腺苷(cyclicadenosinemonophosphate，cAMP)是調(diào)節(jié)細(xì)胞功能和突觸傳遞的重要介質(zhì)，它也是發(fā)熱反應(yīng)的主要中樞介質(zhì)。 熱休克蛋白70(HeatShockProtein70，HSP70)是一種非特異

3、性細(xì)胞保護(hù)蛋白，當(dāng)機(jī)體或組織細(xì)胞受到溫?zé)岽碳r(shí)能夠迅速誘導(dǎo)其產(chǎn)生，以增強(qiáng)細(xì)胞對熱損傷的抵抗能力。 本實(shí)驗(yàn)通過中樞給予非特異性阿片受體拮抗劑納洛酮，觀察其對IL-1β致熱大鼠體溫的影響，并檢測下丘腦中cAMP含量和HSP70表達(dá)情況，從而探討阿片受體在細(xì)胞因子IL-1β引起發(fā)熱效應(yīng)中的作用及機(jī)制。 材料與方法1.動(dòng)物和手術(shù)健康雄性SD大鼠，體重200～250g，由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，室溫(22±2)℃，晝夜光照節(jié)

4、律12h：12h，單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食水。在鹽酸氯胺酮和鹽酸甲苯噻嗪聯(lián)合腹腔麻醉下，參照大鼠腦立體定位圖譜，用立體定位儀向一側(cè)側(cè)腦室插入一外徑為1mm的塑料管，用牙科水泥固定，檢測導(dǎo)管通暢后封閉頂端。術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)，常規(guī)喂養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前對大鼠進(jìn)行測溫服習(xí)。測量體溫時(shí)將數(shù)字溫度計(jì)溫度探頭插入大鼠直腸內(nèi)6cm處，待數(shù)值穩(wěn)定后讀數(shù)，以給藥前1h測得的3次直腸溫的平均值為大鼠基礎(chǔ)體溫。實(shí)驗(yàn)過程中記錄大鼠體溫(0～1h內(nèi)每隔15min，

5、1～2h內(nèi)每隔30min，2～8h內(nèi)每隔60min測量1次)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后檢查插管位置，舍掉插管位置不正確的數(shù)據(jù)。 2.cAMP含量測定在IL-1β引起的發(fā)熱高峰時(shí)間點(diǎn)將大鼠處死后，取下丘腦組織50mg勻漿，離心，取上清按照cAMP放免測定方法檢測。 3.檢測下丘腦組織HSP70表達(dá)水平采用Westernblot方法，取大鼠下丘腦組織，勻漿，離心，取上清進(jìn)行蛋白定量之后，進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，加抗HSP70抗體、二抗，EC

6、L顯影。 4.數(shù)據(jù)分析Westernblot結(jié)果用ChemiImager5500V2.03軟件掃描，用FluorChen2.0軟件定量分析測得IDV值。 數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示；體溫變化情況采用△Tco(℃)分析；各組均數(shù)間顯著性差異用t檢驗(yàn)法檢驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.在IL-1β誘導(dǎo)發(fā)熱大鼠中，下丘腦中cAMP含量和HSP70表達(dá)水平顯著升高。 2.預(yù)先側(cè)腦室注射Nal能明顯抑制大鼠IL-1β性發(fā)

7、熱，同時(shí)下丘腦中cAMP含量和HSP70表達(dá)水平也相應(yīng)減少。 討論在本實(shí)驗(yàn)中，大鼠側(cè)腦室注射IL-1β后，體溫在30分鐘開始升高，給藥后2小時(shí)達(dá)發(fā)熱高峰，熱程持續(xù)6小時(shí)以上，并且也檢測到下丘腦中cAMP含量相應(yīng)增高，這與以往報(bào)道一致。 本實(shí)驗(yàn)觀察到側(cè)腦室預(yù)先給予非特異性阿片受體拮抗劑Nal明顯抑制了IL-1β性發(fā)熱反應(yīng)，即阿片受體被Nal拮抗后不能發(fā)揮其作用，使IL-1β的升溫效應(yīng)減弱或被阻止，這充分說明阿片受體在細(xì)胞因

8、子IL-1β誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)熱效應(yīng)中起著重要的作用；與此同時(shí)大鼠下丘腦中cAMP含量顯著低于IL-1β組(P＜0.01)，提示Nal抑制IL-1β性發(fā)熱可能是通過抑制下丘腦中發(fā)熱介質(zhì)cAMP的合成來實(shí)現(xiàn)的。 在溫度刺激或其他應(yīng)激的條件下，在原核細(xì)胞及真核細(xì)胞能夠合成熱休克蛋白(HeatShockProtein，HSP)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞產(chǎn)生的HSP形成機(jī)體抗熱的保護(hù)作用。HSP70作為一種非特異性細(xì)胞保護(hù)蛋白，具有分子伴侶功能，能

9、夠增強(qiáng)細(xì)胞對熱損傷的抵抗能力，并修復(fù)熱損傷變形的蛋白質(zhì)。在本實(shí)驗(yàn)中，側(cè)腦室注射IL-1β后，隨著發(fā)熱過程的進(jìn)展，下丘腦中HSP70的合成含量逐漸增加。預(yù)先給予非特異性阿片受體拮抗劑Nal后，抑制了IL-1β性發(fā)熱，并且發(fā)現(xiàn)HSP70合成含量顯著降低(P＜0.01)，進(jìn)一步證明了阿片受體在IL-1β致熱過程的主要作用及引導(dǎo)發(fā)熱對機(jī)體的潛在性影響。 本研究的結(jié)果表明，體內(nèi)阿片系統(tǒng)的激活在IL-1β發(fā)熱效應(yīng)以及其后HSP70表達(dá)起著關(guān)