多重耐藥銅綠假單胞菌的抗生素后效應(yīng)及防突變濃度研究.pdf

1、目的:
　　 通過對(duì)阿米卡星、異帕米星、哌拉西林/他唑巴坦,以及阿米卡星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦、異帕米星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦對(duì)我院臨床分離的多重耐藥銅綠假單胞菌(multidrug-resistant pseudomonas aeruginosaMRPA)的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration MIC),抗生素后效應(yīng)(post-antibiotic effect PAE),防突變濃度(

2、mutant preventionconcentration MPC)的測定,初步探討上述藥物單獨(dú)應(yīng)用與聯(lián)合應(yīng)用時(shí)PAE、MPC、MPC/MIC(selective index,SI),、突變選擇窗(mutant selectionwindow,MSW)的差異,為臨床合理使用抗生素,防止細(xì)菌耐藥的產(chǎn)生提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1用瓊脂稀釋法分別測定阿米卡星、異帕米星、哌拉西林/他唑巴坦對(duì)臨床分離的MRPA的MI

3、C:將濃度為1.5×107cfu/ml菌懸液1.5μl接種到經(jīng)倍比稀釋的不同藥物濃度M-H瓊脂培養(yǎng)基上,35℃孵育16～20小時(shí)(h),以無菌落生長的藥物瓊脂平板濃度為MIC。
　　 2用微量肉湯稀釋法測定阿米卡星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦,異帕米星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦的聯(lián)合MIC:以單藥的MIC為基準(zhǔn),棋盤法設(shè)計(jì),相同濃度A(B)藥與系列不同濃度的B(A)藥組合,每種藥物取50μl,加入一次性96孔板中,再將濃度為1.5×105

4、cfu/ml的菌液100μl加入孔中,35℃過夜培養(yǎng),選擇兩藥聯(lián)用時(shí)部分抑菌濃度(fractional inhibitory concentrationFIC)指數(shù)最低時(shí)的藥物濃度組合為聯(lián)合MIC值。
　　 3用菌落計(jì)數(shù)法測定阿米卡星、異帕米星、哌拉西林/他唑巴坦及阿米卡星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦、異帕米星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦對(duì)臨床分離MRPA的PAE:調(diào)菌懸液濃度為106～107cfu/ml,實(shí)驗(yàn)組將2.5ml菌懸液與不同濃度

5、的藥物或藥物組合2.5ml作用2h,藥物終濃度為1/2MIC、1MIC、2MIC、4MIC,對(duì)照組用2.5mlM-H肉湯代替藥物,兩組同步培養(yǎng),4000r/min離心10分鐘,共離心洗滌三次以清除抗生素,在抗生素清除后0,1,2,3,4,5,6h取樣,并且每個(gè)稀釋度分三份傾注營養(yǎng)瓊脂,35℃培養(yǎng)16～20h做菌落計(jì)數(shù),以實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在細(xì)菌恢復(fù)對(duì)數(shù)生長期各自菌落數(shù)增長1個(gè)Log值所需時(shí)間差定為PAE。
　　 4采用瓊脂稀釋法測定

6、阿米卡星,異帕米星,哌拉西林/他唑巴坦及其聯(lián)合用藥對(duì)臨床分離MRPA的MPC:將菌懸液富集至3.0×1010cfu/ml,分別取100μl接種到不同濃度的含阿米卡星,異帕米星,哌拉西林/他唑巴坦單藥及含阿米卡星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦,異帕米星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦兩藥的藥物瓊脂平板上,每個(gè)濃度接種4個(gè)平板,使每個(gè)濃度接種量達(dá)到1.2×1010cfu,35℃孵育72h,以72h無菌落生長的最低藥物或藥物組合瓊脂平板的藥物濃度為MPC。

7、r>　　 5統(tǒng)計(jì)阿米卡星、異帕米星單獨(dú)應(yīng)用與分別聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦的FIC、PAE50、PAE90、MPC50、MPC90、MPC/MIC、MSW,評(píng)價(jià)上述藥物聯(lián)合對(duì)MRPA的PAE、MPC、MPC/MIC、MSW的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1阿米卡星單藥組與聯(lián)合組的MIC50之比為8、MIC90之比9.6,異帕米星單藥組與聯(lián)合組的MIC50之比為16、MIC90之比16;阿米卡星的MICmin、MICmax聯(lián)合

8、組與單藥組比較分別降低32倍、8倍。異帕米星的MICmin、MICmax聯(lián)合組與單藥組比較分別降低15倍,16倍。單藥組與聯(lián)合組阿米卡星MIC相比較,Z=-3.309,P＜0.05差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。異帕米星單藥組與聯(lián)合組MIC相比較,Z=-3.320,P＜0.05差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。阿米卡星與異帕米星分別在單獨(dú)應(yīng)用或聯(lián)合應(yīng)用時(shí)差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2以FIC指數(shù)≤0.5為協(xié)同作用;＞0.5～1為相加作用;＞1～2為無關(guān)作用;

9、＞2為拮抗作用的標(biāo)準(zhǔn)判斷阿米卡星、異帕米星分別聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦的聯(lián)合作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)上述藥物組合對(duì)14株實(shí)驗(yàn)菌的FIC均＜0.5。兩組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
　　 3四種藥物或藥物組合中相同藥物不同濃度的PAE之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P＜0.05),同樣MIC倍數(shù)條件下,阿米卡星與異帕米星的PAE無差別;阿米卡星、異帕米星單藥組與聯(lián)合組的PAE之間差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;阿米卡星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦與異帕米星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦兩種組

10、合在1/2MIC聯(lián)合、1MIC聯(lián)合、2MIC聯(lián)合時(shí)所產(chǎn)生的PAE都呈現(xiàn)相加作用,各組不同濃度之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P＜0.05);在4MIC聯(lián)合時(shí)聯(lián)合組存在PAE協(xié)同作用與相加作用,但兩個(gè)聯(lián)合組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4阿米卡星單藥組與聯(lián)合組比較,異帕米星單藥組與聯(lián)合組比較、阿米卡星單藥組與異帕米星單藥組比較、異帕米星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦與阿米卡星聯(lián)合哌拉西林/他唑巴坦比較MPC,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。阿米卡星、異帕米星聯(lián)用

11、時(shí)比單用時(shí)MPC90值分別降低了10.3倍,16.1倍。阿米卡星聯(lián)合組MPC9/MIC90值由單用組的18.13降至15.36,異帕米星聯(lián)合組MPC90/MIC90值由單用組的17.07降至16,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(z=-2.329,P=0.020,P＜0.05)。用MIC判斷標(biāo)準(zhǔn)劃分阿米卡星,異帕米星單用及分別聯(lián)合哌拉西林他唑巴坦時(shí)MPC值株數(shù)分布構(gòu)成比比較,四種情況構(gòu)成比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩藥聯(lián)用組比單用組均能顯著降低MPC值。MSW

12、出現(xiàn)縮小,不變,擴(kuò)大三種變化,以MSW縮小為主。
　　 結(jié)論:
　　 1阿米卡星,異帕米星分別與哌拉西林/他唑巴坦聯(lián)合均有協(xié)同作用。
　　 2阿米卡星、異帕米星分別與哌拉西林/他唑巴坦聯(lián)合在4MIC聯(lián)合時(shí)抗生素后效應(yīng)可呈現(xiàn)協(xié)同作用,1/2MIC聯(lián)合、1MIC聯(lián)合、2MIC聯(lián)合時(shí)有相加作用。
　　 3阿米卡星,異帕米星與哌拉西林/他唑巴坦聯(lián)合應(yīng)用能夠降低阿米卡星、異帕米星對(duì)多重耐藥銅綠假單胞菌的MPC,有利