魯西牛消化道各段T1R1、T1R3及pepT1基因的表達差異性研究.pdf

1、反芻動物氨基酸營養(yǎng)需要一直是研究的熱點和難點。由于反芻動物采食的氨基酸有一部分會被瘤胃微生物降解,并且其代謝和生產(chǎn)的氨基酸需要量受生理狀態(tài)和生產(chǎn)水平的影響,因此研究人員很難準確測定氨基酸的需要量。而氨基酸在反芻動物生產(chǎn)性能發(fā)揮中所起的重要作用又使得搞清氨基酸需要是一個迫切的問題。氨基酸營養(yǎng)需要測定的困難表現(xiàn)在理論和技術(shù)兩個方面。其中理論上最重要的問題是關(guān)于氨基酸的吸收調(diào)控機制還沒有完全搞清楚。
　　T1R基因家族的T1R1基因和T

2、1R3基因?qū)Π被岬淖R別發(fā)揮著重要的作用,其配體是氨基酸。越來越多的實驗表明了T1R1基因和T1R3基因除了在味蕾中表達外,還在胃腸道中表達,并且是以異源二聚體的形式發(fā)揮作用的,參與氨基酸的吸收調(diào)控。為此,本文以實時熒光定量PCR的方法檢測了在魯西牛消化道各段中T1R1基因和T1R3基因的表達情況及其規(guī)律。
　　動物體內(nèi)對氨基酸的吸收主要是以小肽的形式進行吸收的,而小肽的吸收則需要依靠小肽轉(zhuǎn)運蛋白載體,即pepT1,所以本研究同時

3、還檢測了pepT1基因在魯西牛消化道各段中的表達情況,以揭示這3個基因的表達是否有相關(guān)的聯(lián)系。通過實驗我們得到了以下結(jié)果:
　　1、魯西牛消化道各段中T1R1基因的表達差異性
　　消化道各段組織中T1R1基因的mRNA的表達表現(xiàn)了明顯的差異性。其相對表達量(2-△△CT值)由高到低依次為空腸(29.34)、回腸(23.25)、瘤胃(21.50)、網(wǎng)胃(15.95)、十二指腸(11.01)、瓣胃(4.53)、皺胃(3.00)、

4、盲腸(1.20)、胰腺(1.00)、結(jié)腸(0.98)和直腸(0.96),消化道各段表達差異顯著(P<0.05)。其中空腸相對表達量與回腸和瘤胃差異不顯著(P>0.05),與網(wǎng)胃、十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰腺差異顯著(P<0.05);回腸相對表達量與瘤胃和網(wǎng)胃差異不顯著(P>0.05),與十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰腺差異顯著(P<0.05);十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰腺差異不顯著(P>0.0

5、5)。
　　2、魯西牛消化道各段中T1R3基因的表達差異性
　　消化道各段組織中T1R3基因的mRNA的表達也表現(xiàn)了明顯的差異性。其相對表達量(2-△△CT值)由高到低依次為空腸(29.34)、回腸(23.25)、瘤胃(21.50)、網(wǎng)胃(16.50)、十二指腸(10.98)、瓣胃(4.51)、皺胃(3.03)、盲腸(1.20)、胰腺(1.00)、結(jié)腸(1.00)和直腸(0.96),消化道各段表達差異顯著(P<0.05),其

6、中空腸相對表達量與回腸和瘤胃差異不顯著(P>0.05),與網(wǎng)胃、十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰腺差異顯著(P<0.05);回腸相對表達量與瘤胃和網(wǎng)胃差異不顯著(P>0.05),與十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰腺差異顯著(P<0.05);十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰腺差異不顯著(P>0.05)。
　　3、魯西牛消化道各段中pepT1基因的表達差異性
　　消化道各段組織中pepT1基因的mR

7、NA的表達同樣也表現(xiàn)了明顯的差異性。其相對表達量(2-△△CT值)由高到低依次為空腸(29.84)、回腸(24.24)、瘤胃(22.07)、網(wǎng)胃(16.01)、十二指腸(11.36)、瓣胃(4.56)、皺胃(3.13)、盲腸(1.20)、胰腺(1.00)、結(jié)腸(1.00)、直腸(0.99),消化道各段表達差異顯著(P<0.05)。其中空腸相對表達量與回腸和瘤胃差異不顯著(P>0.05),與網(wǎng)胃、十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰

8、腺差異顯著(P<0.05);回腸相對表達量與瘤胃和網(wǎng)胃差異不顯著(P>0.05),與十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰腺差異顯著(P<0.05);十二指腸、瓣胃、皺胃、盲腸、結(jié)腸、直腸和胰腺差異不顯著(P>0.05)。
　　4、T1R1、T1R3、pepT1基因在魯西牛消化道同一段中的表達分析
　　我們將T1R1、T1R3、pepT1在消化道同一段中的表達進行了分析,發(fā)現(xiàn)三個基因在消化道11個不同部位的表達表現(xiàn)出相同

9、的表達規(guī)律,一個基因表的量高的部位,其他兩個基因表達量也高;一個基因表達量低的部位,另外兩個基因表達量也低,即三個基因具有相同的表達規(guī)律。三個基因在同一組織的表達量差異不顯著,但在不同組織之間表達量差異明顯。其具體表達量為:在空腸中T1R1的量是29.34,T1R3的表達量是29.34,pepT1的表達量是29.84;在回腸中T1R1的量是23.25,T1R3的表達量是23.25,pepT1的表達量是24.24;在瘤胃中T1R1的量是2

10、1.50,T1R3的表達量是21.50,pepT1的表達量是22.07;在網(wǎng)胃中T1R1的量是15.95,T1R3的表達量是16.50,pepT1的表達量是16.01;在十二指腸中T1R1的量是11.01,T1R3的表達量是10.98,pepT1的表達量是11.36;在瓣胃中T1R1的量是4.53,T1R3的表達量是4.51,pepT1的表達量是4.56;在皺胃中T1R1的量是3.00,T1R3的表達量是3.03,pepT1的表達量是3

11、.13;在盲腸中T1R1的量是1.20,T1R3的表達量是1.20,pepT1的表達量是1.20;在胰腺中T1R1的量是1.00,T1R3的表達量是1.00,pepT1的表達量是1.00;在結(jié)腸中T1R1的量是0.98, T1R3的表達量是1.00,pepT1的表達量是1.00;在直腸中T1R1的量是0.96,T1R3的表達量是0.96,pepT1的表達量是0.99。這說明三個基因在氨基酸的吸收調(diào)控中具有明顯的
　　從以上的結(jié)果我

12、們可知,T1R1、T1R3、pepT1這3個基因在魯西牛的消化道各段中均表達,并且這3個基因在消化道各段中的表達差異性是一致的。其中, T1R1、T1R3基因在空腸、回腸和瘤胃中的表達量最高,由此,我們可以初步推測,反芻動物氨基酸吸收調(diào)控的主要部位是空腸、回腸和瘤胃,而氨基酸吸收所依賴的pepT1基因在這個3個部位的表達量同樣也很高,說明了這3個基因在氨基酸吸收調(diào)控中存在協(xié)同作用,初步推測反芻動物吸收了氨基酸后,與氨基酸受體T1R1/T