膽管脫落細(xì)胞組織學(xué)和膽管脫落細(xì)胞中膽管癌相關(guān)基因的表達(dá)研究.pdf

1、研究目的： 膽管癌是起源于膽管上皮的惡性腫瘤。由于缺乏敏感性和特異性均很高的早期診斷膽管癌的方法，膽管癌診斷時多為晚期，手術(shù)切除率低、預(yù)后差。如何早期診斷膽管癌，提高膽管癌患者生存率是當(dāng)前研究的重點(diǎn)。本研究以膽管脫落細(xì)胞為對象，研究其形態(tài)學(xué)特點(diǎn)、體外培養(yǎng)情況以及膽管癌相關(guān)基因(CDX2、MUC1、MUC2、MUC3、MUC5AC、TFF1)的表達(dá)情況，了解膽管惡性腫瘤的生物學(xué)行為，為在細(xì)胞和分子生物學(xué)水平研究膽管惡性腫瘤的發(fā)生提

2、供確切的檢測方法，尋找膽管癌早期診斷的線索。 研究方法： 1、收集我院梗阻性黃疸住院病人膽汁，運(yùn)用不同的離心方法采集膽汁中脫落細(xì)胞，進(jìn)行瑞一姬和Hoechst33258染色，顯微鏡下觀察。 2、體外培養(yǎng)膽汁中脫落細(xì)胞，探討膽管癌細(xì)胞體外培養(yǎng)方法。 3、在膽管脫落細(xì)胞中提取總RNA，應(yīng)用半定量RT-PCR方法檢測膽管癌相關(guān)基因CDX2、MUC1、MUC2、MUC3、MUC5AC、TFF1 mRNA在膽管癌和

3、膽管結(jié)石病變中的表達(dá)情況，在基因水平探討膽管癌發(fā)病機(jī)制。 研究結(jié)果： 1、應(yīng)用過濾和梯度離心法在膽管良、惡性病變患者離體6小時的膽汁中可采集到大量的膽管脫落細(xì)胞，沉淀后固定染色發(fā)現(xiàn)，所采集到的膽管脫落細(xì)胞保持原有細(xì)胞形態(tài)，良性或惡性病變膽管脫落細(xì)胞具有明顯的形態(tài)學(xué)特征。 2、應(yīng)用普通培養(yǎng)方法，膽管癌膽汁中脫落細(xì)胞可在體外培養(yǎng)生長數(shù)天至一個月。長期體外培養(yǎng)的膽管癌細(xì)胞能保持腫瘤細(xì)胞特征。 3、CDX2、MU

4、C1、MUC2 mRNA僅在膽管癌患者膽管脫落細(xì)胞中表達(dá)，而在膽管結(jié)石患者膽管脫落細(xì)胞中相應(yīng)mRNA表達(dá)很少發(fā)現(xiàn)，兩者表達(dá)程度差異有顯著性(P<0.01)。MUC5AC和TFF1 mRNA在膽管癌和膽管結(jié)石患者膽汁脫落細(xì)胞中均有表達(dá)，兩者在膽管癌脫落細(xì)胞中表達(dá)水平高于膽管結(jié)石脫落細(xì)胞，差異有顯著性(P<0.05)。MUC3 mRNA僅在膽管結(jié)石脫落細(xì)胞中有表達(dá)。 結(jié)論： 1、經(jīng)過改進(jìn)樣本采集及染色方法，提高了采集膽汁脫落

5、細(xì)胞數(shù)量，增強(qiáng)了檢測的敏感性和穩(wěn)定性。無論良性或惡性病變，膽管梗阻后膽汁引流中均存在較大數(shù)量脫落細(xì)胞，其形態(tài)特征具有病變性質(zhì)代表性，可以作為臨床診斷依據(jù)，還可進(jìn)一步認(rèn)識膽管病變過程中膽管上皮細(xì)胞形態(tài)，為在細(xì)胞和分子生物學(xué)水平研究膽管惡性腫瘤發(fā)生提供新的檢測方法。 2、膽管癌膽汁中膽管脫落細(xì)胞經(jīng)分離后可在體外進(jìn)行培養(yǎng)，部分細(xì)胞經(jīng)長期培養(yǎng)能保持膽管癌惡性腫瘤特征，膽管癌細(xì)胞離體培養(yǎng)為深入研究膽管癌發(fā)生發(fā)展特性提供了新的手段。