脊髓性肌萎縮癥的基因診斷及其應(yīng)用研究.pdf

1、脊髓性肌萎縮癥(spinal muscular atrophy，SMA)，是較常見的常染色體隱性遺傳病。本病由于脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元變性導(dǎo)致進(jìn)行性、對稱性肌萎縮和肌張力減低．其發(fā)病率為1:5 000～l:10 000，攜帶者的發(fā)生率為1:35～1:50，居致死性常染色體隱性遺傳病的第2位，僅次于囊性纖維變。SMA至今無有效的治療方法，患者生活質(zhì)量低下，給社會和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)，所以對該病進(jìn)行基因診斷及產(chǎn)前基因診斷具有非常重要的意義。19

2、90年Brzustowicz等將SMA基因定位于5q11.2-13.3，通過進(jìn)一步研究，在這一區(qū)域先后確定了4個(gè)與SMA有關(guān)的基因，其中運(yùn)動神經(jīng)元生存基因(survival motor neuron，SMN)為SMA的主要致病基因。SMN基因有兩個(gè)拷貝，其中端粒側(cè)SMN基因是SMA的決定基因。本研究主要通過對SMN基因的研究來對SMA進(jìn)行基因診斷。 材料與方法： 一、研究對象： (一)正常對照及標(biāo)準(zhǔn)對照：30名無

3、遺傳病家族史的健康成年人與2份SMN基因拷貝數(shù)確定的正常人DNA標(biāo)準(zhǔn)品(由福建醫(yī)科大學(xué)饋贈)。 (二)SMA患者及其父母：26名由中國醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院臨床診斷的患者，為該院2005年7月至2008年3月門診及住院病人。全部病例的臨床表現(xiàn)均符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)及分型。52名SMA患者的父母． (三)產(chǎn)前基因診斷：既往生產(chǎn)過SMA患兒(經(jīng)臨床及基因診斷確診為SMA)的孕婦20名，孕16-20周，取其羊水。 二、實(shí)驗(yàn)方

4、法： (一)應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)對運(yùn)動神經(jīng)元生存基因(SMN)第7外顯子進(jìn)行缺失檢測。 (二)采用多重PCR結(jié)合變性高效液相色譜(DHPLC)技術(shù)對SMN1、SMN2基因的拷貝數(shù)進(jìn)行定量研究。 結(jié)果： 1.應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)從26名SMA患者中檢測出25名為SMN1基因7號外顯子缺失。 2.應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)從20例羊水標(biāo)本中檢測出12例為SMN1基因7號外顯子缺失。 3.

5、應(yīng)用多重PCR結(jié)合變性高效液相色譜(DHPLC)技術(shù)：從隨機(jī)選取的30名正常人中檢測出1名攜帶者，15名SMA患者檢測結(jié)果均為患者，26名疑似攜帶者(患者的父母)檢測結(jié)果均為攜帶者。 結(jié)論： 1、應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)可對95％以上的SMA患者進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的基因診斷及產(chǎn)前基因診斷。 2、我們應(yīng)用多重PCR結(jié)合變性高效液相色譜(DHPLC)技術(shù)對正常人群及SMA家系成員中進(jìn)行了基因攜帶者的篩查，檢測結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)