動脈粥樣硬化痰證小型豬LXRa和LXRb表達的變化.pdf

1、研究目的：動脈粥樣硬化（AS）是一種慢性疾病，也是引發(fā)其他心腦血管疾病的最重要的因素之一。其主要病變特征是動脈某些部位的內膜下脂質沉積，并伴有平滑肌細胞及纖維成分的增生，逐漸發(fā)展形成局部的斑塊。動脈壁也因而增厚、變硬，斑塊組織內部壞死崩解與沉積的脂質結合，形成“粥樣”物質的病理改變。因此脂類代謝和血液流變學的異?？梢援斪魇莿用}粥樣硬化的重要標志。有其始動因素在于飲食失節(jié)，過食肥甘，致脾氣虧虛，脾運失常，水谷難以化生精微。中醫(yī)對AS的認識

2、是逐步深入的，大部分學者均認為AS與“痰”有關。“痰”是人體水液代謝障礙所形成的病理產物。與AS密切相關的“痰”主要指祖國醫(yī)學所說的“無形之痰”。 中醫(yī)藥在防治動脈粥樣硬化方面具有潛在的優(yōu)勢和鮮明的特點，本研究造出動脈粥樣硬化痰證的小型豬動物模型以期為中醫(yī)微觀辨證提供依據；運用分子生物學技術初步探討肝X受體a（LXRa）和肝X受體b（LXRb）在動脈粥樣硬化痰證發(fā)生、發(fā)展過程中的表達變化。 研究方法：由于小型豬在解剖學、

3、生理學、營養(yǎng)代謝等方面與人類極為相似，疾病的發(fā)生發(fā)展和轉歸等方面更接近與人類。通過近交選育后的小型豬品種純、遺傳背景清楚，對實驗耐受性強、反應均衡、實驗重復性高。所以本次研究以五指山小型豬（WZSP）作為實驗動物。采用損傷頸動脈加飼養(yǎng)高脂高膽固醇的方法制造動脈粥樣硬化痰證的動物模型。共飼養(yǎng)五指山小型豬20頭，隨機分成三組，正常組4頭，喂養(yǎng)基礎飼料；實驗組分為兩組，一組飼養(yǎng)1.5％膽固醇，共8頭，另外一組飼養(yǎng)3％的膽固醇，共8頭。飼養(yǎng)周期

4、為十二個月。每月測定豬體重。飼養(yǎng)4個月后，每兩個月（即6、8、10月）抽血檢測總膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）。最后將所有小型豬殺死取其心臟，肝臟，脾臟，肺臟，腎臟及脂肪組織放－80℃保存以提取各組織RNA分析與膽固醇代謝相關兩個基因LXRa和LXRb的組織表達差異。制備主動脈組織切片，主動脈取出后縱行切開，10％福爾馬林固定，蘇丹III染色，肉眼觀察主動脈內膜硬化斑塊，其中內膜表面粗糙

5、，有大片蘇丹III著色極深的為病變組織。而后石蠟包埋切片，HE染色，顯微鏡下觀察。 結果：實驗組與對照組比較，血漿TC、TG、LDL水平升高，HDL水平降低；實驗組小型豬肝臟有大量的脂肪沉積，動脈有明顯的脂質條紋及斑塊；3％組較1.5％組病變明顯。3％的膽固醇組動脈粥樣硬化小型豬肝臟，脂肪組織中的LXRa和LXRb的mRNA表達均上調。 結論：本實驗說明高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)小型豬可建立動脈粥樣硬化痰證模型；動脈粥樣硬化痰