脫細(xì)胞羊膜在兔股骨近端誘導(dǎo)成骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 初步探討人完全脫細(xì)胞羊膜(humanacellularamnioticmembrane，HAAM)的在兔股骨近端的成骨誘導(dǎo)能力，為羊膜作為骨組織工程自然衍發(fā)基質(zhì)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)而為骨缺損和骨融合的治療提供新的治療思路。 方法： 使用本課題組研發(fā)的羊膜無酸堿脫細(xì)胞專利技術(shù)制取HAAM，約2.0cm×2.0cm大小，做成約為0.5cm×0.4cm×0.3cm大小卷團(tuán)狀。27只成年大耳白兔，隨機(jī)分為羊膜組、PL

2、GA組和空白對照組，每組進(jìn)而分為1周、2周、4周三小組，每小組3只?？瞻讓φ战M在兔股骨背側(cè)近端(大轉(zhuǎn)子下)單純制作直徑約0.6cm的骨缺損，而羊膜組在兔股骨近端骨缺損處植入HAAM，PLGA組則植入PLGA(約0.5cm×0.4cm×0.3cm大小)。分別在1、2、4周時(shí)處死兔子，截取標(biāo)記的骨缺損部位。甲醛固定后常規(guī)石蠟定向包埋，切片，分別對其行HE染色，光學(xué)顯微鏡組織學(xué)觀察和免疫組織化學(xué)染色，對比觀察各組骨缺損處的成骨能力。

3、結(jié)果： 組織學(xué)觀察：術(shù)后1周時(shí)，羊膜組中血管長入層狀排列的羊膜基質(zhì)之間，大量的間充質(zhì)細(xì)胞隨血管一起侵入羊膜基質(zhì)間隙。細(xì)胞附著于羊膜表面，并沿羊膜基質(zhì)纖維方向成極性生長。在羊膜與髓腔交界處向植入物內(nèi)部延伸。未見炎性攻擊和液化現(xiàn)象；PLGA組血細(xì)胞侵入PLGA間隙，細(xì)胞同PLGA表面未粘附。未見免疫攻擊及炎性反應(yīng)?？瞻捉M骨缺損處血腫形成，可見大量紅細(xì)胞、間充質(zhì)細(xì)胞、脂肪滴及毛細(xì)血管。術(shù)后2周時(shí)，羊膜組中HAAM被進(jìn)一步吸收，血管生成

4、減少，緊貼HAAM基質(zhì)邊緣，間充質(zhì)細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞，軟骨細(xì)胞后方跟隨著一層較厚的較成熟軟骨組織。細(xì)胞在材料表面黏附良好，且在羊膜空隙中相互之間有突起連接，形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。PLGA組中PLGA開始軟化降解，PLGA間隙形成肉芽組織，未見軟骨細(xì)胞?？瞻捉M骨缺損處演變轉(zhuǎn)化為肉芽組織，血管生成活躍。術(shù)后4周時(shí)，羊膜組中羊膜組織基本消失，血管生成減少，肥大的軟骨細(xì)胞增多，骨缺損處逐漸填充以軟骨組織。PLGA組中PLGA降解殘余部分可見細(xì)胞附著，肉

5、芽組織中血管豐富，但未見軟骨細(xì)胞及成骨現(xiàn)象?？瞻捉M中骨缺損處填充肉芽組織，血管生成仍然活躍，未見向軟骨及骨組織轉(zhuǎn)化的跡象。VEGF染色觀察：術(shù)后1周時(shí)，羊膜組在HAAM表面及間隙呈陽性表達(dá)，PLGA組PLGA膜間隙中有散在的著色，空白組很少表達(dá)。術(shù)后2周時(shí)，羊膜組新生血管周圍呈較強(qiáng)陽性表達(dá)，PLGA組表達(dá)稍弱，空白組散在表達(dá)陽性。4周時(shí)，羊膜組軟骨組織內(nèi)幼稚的軟骨細(xì)胞VEGF表達(dá)陰性，成熟和肥大的軟骨細(xì)胞較強(qiáng)陽性表達(dá)，在與原始骨小梁相連

6、處的肥大軟骨細(xì)胞亦呈較強(qiáng)陽性表達(dá)。此時(shí)，PLGA組隨血管的長入表達(dá)開始增強(qiáng)?？瞻捉M因?yàn)槿庋拷M織中毛細(xì)血管豐富表達(dá)活躍。BMPs染色觀察：術(shù)后1周時(shí)，各組的血管附近均呈較強(qiáng)陽性表達(dá)。術(shù)后2周時(shí)，羊膜組新生血管周圍呈較強(qiáng)陽性表達(dá)，PLGA組表達(dá)減弱，空白組散在表達(dá)陽性。4周時(shí)，羊膜組軟骨細(xì)胞表達(dá)陰性，成熟和肥大的軟骨細(xì)胞陽性表達(dá)稍強(qiáng)。PLGA組隨血管的長入表達(dá)開始增強(qiáng)?？瞻捉M陽性表達(dá)轉(zhuǎn)強(qiáng)。 結(jié)論： 相比于PLGA和空白對照，