射干異黃酮類成分的質量控制方法研究.pdf

1、本課題以射干藥材為研究對象，在文獻總結的基礎上，通過比較索氏提取、熱回流提取、超聲提取，微波提取等四種提取方式，選取微波提取技術對射干異黃酮類成分進行制備，采用L9(34)正交設計優(yōu)化了提取參數；通過HPLC-DAD/ESI-MS/MS技術分離并定性鑒別了射干藥材中9種主要的異黃酮類成分；采用高速逆流色譜技術及二維柱切換制備液相色譜技術對射干藥材中主要的異黃酮類成分進行了制備；最后對16種不同產地的射干藥材進行高效液相色譜指紋圖譜比較及

2、其9種主要異黃酮類成分的定量分析。 具體內容如下： 一、射干異黃酮類成分的提取與含量測定 通過比較索氏提取、熱回流提取、超聲提取，微波提取四種提取方式，證實微波和超聲提取異黃酮類成分提取率結果相近，且明顯高于熱回流和索氏提??；微波提取時間大大少于超聲提取時間，因此對微波提取中的提取溶劑、固液比、提取時間及提取溫度進行了較為系統的研究，采用L9(34)正交實驗設計，正交設計的均值及方差分析得出的最佳提取工藝條件為6

3、0％乙醇，乙醇用量為藥材的12倍，提取溫度75℃，提取10min。 二、射干異黃酮類化學成分的LC-DAD/ESI-MS/MS分析 采用高效液相色譜-二極管陣列檢測．串聯質譜法對射干藥材中異黃酮類化學成分進行快速定性鑒識。實驗結果表明：通過對色譜和質譜條件的優(yōu)化，使射干藥材中9種主要的異黃酮類化合物在60min內達到基線分離。根據供試品的總離子流圖，并與有關文獻報道及質譜資料比對，初步鑒識射干藥材中9種異黃酮類化合物分別

4、為鳶尾苷、鳶尾新苷、野鳶尾苷、Irilin D、鳶尾苷元、鳶尾新苷元、野鳶尾黃素、次野鳶尾黃素、白射干素。 三、高速逆流色譜法分離制備射干藥材中5種異黃酮類成分 建立高純度制備射干藥材中5種異黃酮類成分的高速逆流色譜方法，利用高速逆流色譜兩種不同的分離體系分別制備得到2種異黃酮苷和3種異黃酮苷元。第一次高速逆流色譜分離的溶劑體系及體積比為正己烷：正丁醇：甲醇：水=1：4：1.5：6，分取上、下相，下相為流動相，轉速為85

5、0rpm，流動相速度為1.5mL/min，800mg射干藥材微波提取物溶于60mL下相中，分四次連續(xù)進樣，根據檢測器圖譜接收目標化合物。隨后對第一次高速逆流色譜分離體系中主要含有鳶尾苷元的固定相液進行回收，并應用氯仿：甲醇：水=4：2.7：2溶劑體系進行第二次高速逆流色譜分離制備，轉速為860rpm，流動相速度為2.0mL/min，根據檢測器圖譜接收目標化合物。最終得到了鳶尾苷、野鳶尾苷、鳶尾苷元、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素5種異黃酮類化

6、合物單體。 四、射干異黃酮類化合物的二維柱切換制備液相色譜法研究 以六通切換閥代替?zhèn)鹘y定量蓄積環(huán)，使得從一維到二維的切割體積不再受定量環(huán)容積的限制，擴大了方法的應用范圍；同時保證樣品組分在二維色譜柱之間100％的切換率，極大地提高了分離的效率。當加大進樣量時，在一維制備柱中難以與干擾組分分離的鳶尾苷、野鳶尾苷、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素在線切換到第二維制備柱中進行分離，結合連續(xù)進樣大幅度減少單次分離制備的消耗時間和消耗溶劑

7、，從而建立了射干藥材中5種主要異黃酮類化學成分分離純化的HPLC-HPLC高效、快速在線分析制備技術。從1.5g射干藥材微波提取物中獲得鳶尾苷87.2mg，野鳶尾苷108.9mg，鳶尾苷元24.2mg，野鳶尾黃素81.8mg和次野鳶尾黃素53.7mg。經HPLC純度分析檢測結果可知5種異黃酮類化合物單體的純度均大于98.6％。 五、不同產地的射干藥材中異黃酮類成分的含量測定 建立了高效液相色譜同時測定射干藥材中9種異黃酮