PHA-CD3AK細(xì)胞的生物學(xué)特性及其臨床應(yīng)用初步研究.pdf

1、由于傳統(tǒng)的手術(shù)、化療和放療的局限性,腫瘤治療迫切需要新的手段、開辟新的途徑。近年來,隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及生物技術(shù)的迅猛發(fā)展,推動了整個醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中生物治療學(xué)的發(fā)展,腫瘤生物治療越來越受到人們的廣泛關(guān)注,其中的細(xì)胞過繼免疫治療成為近年來研究的熱點(diǎn)。過繼免疫治療最關(guān)鍵的是選擇理想的效應(yīng)細(xì)胞,從上世紀(jì)八十年代發(fā)現(xiàn)LAK細(xì)胞以來,先后有TIL、A-LAK、CTL、TAK、CIK細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于臨床試驗(yàn),但都存在著各自不同的缺陷和不足。我

2、們探索并研究了新的腫瘤過繼免疫效應(yīng)細(xì)胞—PHA-CD3AK細(xì)胞,這一新的效應(yīng)細(xì)胞在增殖倍數(shù)、殺傷活性、體外存活時間等各方面均優(yōu)于其他效應(yīng)細(xì)胞。本研究對其生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用進(jìn)行了初步研究。主要內(nèi)容有:
　　1、PHA-CD3AK細(xì)胞的制備及其生物學(xué)特性初步研究
　　目的:研究PHA-CD3AK細(xì)胞的體外誘導(dǎo)方法及其生物學(xué)特性,并與LAK細(xì)胞進(jìn)行比較。
　　方法:分離人外周血單個核細(xì)胞(PBMC),采用植物血凝素(PHA

3、)、單克隆抗體(anti-CD3McAb)和基因重組人白細(xì)胞介素2(rhIL-2)、共同誘導(dǎo)制備PHA-CD3AK細(xì)胞;應(yīng)用流式法分析PHA-CD3AK細(xì)胞的免疫表型、乳酸脫氫酶法(LDH)檢測PHA-CD3AK細(xì)胞的殺傷活性,并觀察其形態(tài);吉姆薩染色法觀察其核型。
　　結(jié)果:微量的anti-CD3McAb(0.05ug/m1)輔以少量的rhIL-2(300u/m1)和PHA(100ug/mL)共同培養(yǎng),即能誘導(dǎo)和大量擴(kuò)增PHA-

4、CD3AK細(xì)胞,其擴(kuò)增倍數(shù)顯著高于LAK細(xì)胞,維持高擴(kuò)增的時間也遠(yuǎn)較LAK細(xì)胞持久;當(dāng)效靶細(xì)胞比為80:1時, PHA-CD3AK細(xì)胞對體外腫瘤細(xì)胞(K562)殺傷的百分率為56.5％;免疫表型檢測PHA-CD3AK細(xì)胞中CD3~+、CD4~+、CD8~+細(xì)胞的比率分別為(86.5±5.89)％、(38.20±5.27)％、(42.63±3.50)％;核型為正常二倍體,染色體數(shù)目為46條。
　　結(jié)論: PHA-CD3AK細(xì)胞是以C

5、D3~+、CD4~+、CD8~+細(xì)胞為主的異質(zhì)細(xì)胞群,并具有淋巴母細(xì)胞樣特征,PHA-CD3AK細(xì)胞為正常二倍體細(xì)胞。PHA-CD3AK細(xì)胞是易于體外誘導(dǎo)、擴(kuò)增能力強(qiáng),體外存活時間長、殺瘤活性高的一種具有廣闊應(yīng)用前景的腫瘤過繼免疫效應(yīng)細(xì)胞。
　　2、PHA-CD3AK細(xì)胞過繼免疫治療中晚期惡性腫瘤的初步臨床研究
　　目的:觀察抗CD3單克隆抗體激活的殺傷細(xì)胞(anti-CD3 monoclonal antibody acti

6、vated killer cell, PHA-CD3AK)過繼免疫治療中晚期惡性腫瘤的療效。
　　方法:從51例惡性腫瘤患者自體外周血分離單個核細(xì)胞,加入PHA、anti-CD3mAb、重組人IL-2(rhIL-2)體外誘導(dǎo)后擴(kuò)增培養(yǎng),制備自體PHA-CD3AK細(xì)胞。待細(xì)胞培養(yǎng)至第12~14天時取樣用于質(zhì)控檢測,收集質(zhì)控檢測合格的PHA-CD3AK細(xì)胞,調(diào)整至終濃度為(4.0~6.0)×10~9/L,靜脈回輸至患者體內(nèi),每例患者治

7、療3個療程,每療程回輸5次(每2 d回輸1次),每次回輸細(xì)胞數(shù)不低于1×10~9,每療程回輸細(xì)胞總數(shù)大于5×10~9。應(yīng)用人T細(xì)胞亞群檢測試劑盒和流式細(xì)胞儀測定治療前后患者外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+T細(xì)胞以及CD16~+56~+細(xì)胞(NK細(xì)胞)比例;觀察治療前后患者的相關(guān)化檢指標(biāo)、生活質(zhì)量以及不良反應(yīng);評定療效,計算有效率和臨床受益率。
　　結(jié)果:分離制備的PHA-CD3AK細(xì)胞符合活性細(xì)胞質(zhì)控要求,可用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)

8、治療。PHA-CD3AK細(xì)胞過繼免疫治療后,患者外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+ T細(xì)胞以及CD16~+56~+細(xì)胞(NK細(xì)胞)比例分別為(48.88±9.42)％、(35.09±4.11)％、(28.17±4.97)％、(20.31±6.98)％,較治療前均顯著升高(均P＜0.05)。51例患者中,45例患者治療后全身癥狀改善明顯;所有患者治療后相關(guān)化驗(yàn)指標(biāo)均未出現(xiàn)異常變化,也未出現(xiàn)其他全身毒副反應(yīng);其中完全緩解6例、部分緩解

9、14例、微效10例、穩(wěn)定12例、進(jìn)展9例,總有效率達(dá)58.8％,臨床受益率達(dá)82.4％。
　　結(jié)論:PHA-CD3AK細(xì)胞過繼免疫治療惡性腫瘤療效確切,并能有效改善和提高患者的機(jī)體免疫功能,而且安全,無副作用。本研究對PHA-CD3AK細(xì)胞的體外誘導(dǎo)制備以及生物學(xué)特性和體內(nèi)臨床應(yīng)用進(jìn)行了系統(tǒng)的初步研究,為進(jìn)一步臨床推廣應(yīng)用提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和有益的探索。初步表明PHA-CD3AK細(xì)胞是一種安全、有效,具有廣闊應(yīng)用前景的抗腫瘤過繼