超聲診斷移植腎急性排斥的動物實驗研究.pdf

1、目的：腎移植術后急性排斥(AR)反應是導致移植腎功能障礙的主要原因，AR如能早期、準確診斷，并給予合理的治療是提高移植腎存活的關鍵。多年來，多普勒超聲由于具有簡便、無創(chuàng)、可重復、價格相對低廉的優(yōu)點，一直被認為是腎移植術后并發(fā)癥的重要監(jiān)測工具，但它對AR的診斷價值還是一個有爭論的問題。因此，本研究在常規(guī)彩色多普勒血流顯像(CDFI)和彩色多普勒能量圖(CDE)檢查的基礎上，聯(lián)合應用新近發(fā)展起來的超諧波聲學造影(UHCI)和聲學密度定量(A

2、D)技術，探討其定量評價AR反應不同時期移植腎皮質(zhì)血流灌注的價值；并分析各灌注參數(shù)與臨床生化指標變化的關系，以尋找更客觀、敏感的超聲檢測指標，為臨床早期診斷腎移植術后AR反應提供有力依據(jù)。 資料與方法：1.急性排斥動物模型的建立：健康雜種雄性犬10只，體重10～15kg，隨機分為5組，每組各2只犬。采用3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉后，行單側(cè)原腎切除術，移植于異體右髂窩。 2.超聲檢查：采用HPSonos550

3、0型彩色多普勒超聲診斷儀，L7540(頻率4～10MHz)及S3探頭(頻率1～3MHz)。常規(guī)腎移植術后1、3、5…(T1、T3、T5…)隔天對移植腎進行一次超聲檢查，直至動物死亡，并同期測定血清肌酐(SCr)、24h內(nèi)生肌酐清除值(CCr)。 ①高頻及多普勒超聲檢查：先行二維超聲掃描，觀察移植腎錐體大小，皮質(zhì)厚度，皮髓質(zhì)輪廓及分界等。然后選擇CDFI及CDE模式顯示移植腎皮質(zhì)區(qū)的血管分布及血流灌注情況，并將CDE顯示的腎皮質(zhì)血

4、流灌注分為四級。在彩色多普勒清晰顯示腎皮質(zhì)血管樹的狀態(tài)下，用脈沖多普勒在小葉間動脈中取樣，在至少獲取三個形態(tài)一致的頻譜波形后凍結(jié)圖像，測定相關的血流動力學參數(shù)：收縮期峰流速(PSV)、舒張末期流速(EDV)、阻力指數(shù)(RI)。每例取三處不同皮質(zhì)部位小葉間動脈檢測，取其平均值記錄。 ②聲學造影：采用間歇觸發(fā)超諧波聲學造影，觸發(fā)間隔設定為3000ms，發(fā)射頻率為1.3MHz，接收頻率為3.6MHz，機械指數(shù)為1.5，且每次實驗保持儀

5、器設置條件不變。在取得動物移植腎長軸滿意圖像后，固定探頭不動，調(diào)出T-INT狀態(tài)，然后經(jīng)外周靜脈彈丸式注入“全氟顯”造影劑(南方醫(yī)院臨床藥理基地研制)，劑量0.03ml/kg，注射后立即尾隨2ml生理鹽水沖洗管道，重復注射每次間隔＞15min。動態(tài)記錄所有圖像資料并存儲于儀器內(nèi)置磁光盤中供后期分析。 ③聲學定量(AD)分析：調(diào)出存儲的造影圖像資料，將半月形取樣框(感興趣區(qū)，21×21像素)置于移植腎皮質(zhì)(距包膜3mm以內(nèi))中，取

6、三個不同位點測定以下指標：峰值密度(PI)、曲線下面積(AUC)、降支減半時間(HT)和平均通過時間(MTT)；并根據(jù)公式計算50％清除斜率：50％清除斜率=(峰值強度—50％峰值強度)/降支減半時間。所得上述各指標參數(shù)取平均值記錄。 3.病理學檢查：所有動物在每個時間點造影后，均經(jīng)皮穿刺活組織檢查或死后尸解。標本以10％的福爾馬林固定，制成HE及PAS染色切片。 4.統(tǒng)計學處理：所有測量指標用均數(shù)±標準差表示，用SPS

7、S10.0軟件進行統(tǒng)計學分析。不同時間點移植腎血流動力學參數(shù)(PSV、EDV、RI)，血流灌注參數(shù)(PI、AUC、HT、MTT)及SCr、CCr的比較采用多樣本均數(shù)的兩兩比較(Bonferroni法)，以P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異非常顯著。并采用Pearson相關分析，以P＜0.05為具有直線相關關系，P＞0.05為無直線相關關系。 結(jié)果：1.移植腎穿刺病理檢查：T1與T3時間點移植腎基本正常，T5～T11時間點

8、移植腎發(fā)生了逐漸加重的AR反應。據(jù)此，我們將移植腎AR反應發(fā)生的漸進過程分為四個階段：未發(fā)生AR反應前(T1與T3時間點)，早期AR反應(T5時間點)，中期AR反應(T7時間點)，晚期AR反應(T9和T11時間點)。 2.CDFI顯示：隨著AR反應的逐漸加重，PSV和EDV逐漸減低，RI逐漸升高；PSV、EDV和RI的變化早于SCr的變化，是診斷AR的較好指標，但RI值在AR早期可正常，診斷AR反應無特異性。 3.CDE

9、顯示：在AR反應同一階段的同一掃查切面上比較，其顯示的血流信號比CDFI明顯豐富；AR反應的程度與CDE顯像級別相關；CDE顯像分級能較好地評價移植腎皮質(zhì)部血流灌注情況，其敏感性較高，但診斷AR的準確性不高。 4.造影后二維灰階顯像的視覺效果判定：發(fā)生AR反應前移植腎皮質(zhì)回聲顯著均勻增強，發(fā)生AR反應的移植腎皮質(zhì)灌注不良，出現(xiàn)充盈缺損區(qū)。 5.造影后聲學密度定量分析：腎移植術后T5～T11時間點，隨著AR反應的逐漸加重，

10、灌注參數(shù)PI、AUC、HT及MTT逐漸下降，50％清除斜率逐漸增加，與T1時間點比較均有顯著性意義(P＜0.05)。 6.各灌注參數(shù)與SCr、CCr的相關分析：從T1～T11時間點，各灌注參數(shù)(PI、AUC、HT、MTT)與SCr成不同程度的負相關，與CCr成不同程度的正相關；但各灌注參數(shù)與CCr的變化趨勢一致，相關程度較高。 結(jié)論：1.應用高頻探頭加CDFI及CDE技術，使移植腎包膜下小血管得以清晰顯示，這為研究AR時

11、皮質(zhì)血流灌注提供了一種好方法。但單獨應用CDFI及CDE技術診斷移植腎AR的特異性并不高，若二者結(jié)合，能大大提高AR診斷的準確性，比血清肌酐值有更好的組織學預測價值。 2.間歇超諧波聲學造影與AD技術結(jié)合，可以提供比常規(guī)血流顯像更多、更準確的血流灌注信息，是一種評價移植腎皮質(zhì)血流灌注變化較理想的、安全而有效的方法。另外，由AD分析所獲得的血流灌注參數(shù)(PI、AUC、HT、MTT)與腎實質(zhì)的血流量密切相關，是到目前為止較客觀、敏感