IL-8在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜增生中的作用探討.pdf

1、趨化性細(xì)胞因子(chemokine)是一類可誘導(dǎo)的，分子量為7～10kDa的促炎細(xì)胞因子，可由多種細(xì)胞產(chǎn)生，具有激活和趨化白細(xì)胞的作用。近年發(fā)現(xiàn)趨化因子除了刺激多種細(xì)胞發(fā)生趨化游走外，在腫瘤細(xì)胞增殖中還具有生長因子樣作用。大量炎性細(xì)胞所分泌的趨化因子是否具有促進(jìn)FLS增殖，最終導(dǎo)致滑膜細(xì)胞的增生成為我們關(guān)注的重點。本研究以類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的成纖維樣滑膜細(xì)胞為研究對象，檢測趨化因子中最常見的IL-8的A型受體CXCR1在該細(xì)胞表面的表達(dá)情況

2、，再給予相應(yīng)配體IL-8刺激，以求探明IL-8在RA滑膜增生這一病理過程中的作用。為了確認(rèn)CXCR1是否在RAFLS中表達(dá)，我們分別從mRNA和蛋白水平進(jìn)行了檢測。首先收集并培養(yǎng)了源自臨床手術(shù)切除的RA病人滑膜組織的FLS細(xì)胞，用RT-PCR和Western-blot的方法檢測到了CXCR1的表達(dá)，再以臨床獲得的RA滑膜病理標(biāo)本制成石蠟切片，用免疫組織化學(xué)的方法亦在蛋白水平證實了CXCR1的表達(dá)。 我們將體外培養(yǎng)人類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

3、的滑膜成纖維細(xì)胞，分組后分別加入不同濃度IL-8刺激，細(xì)胞計數(shù)法檢測其對FLS增殖的影響[。結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-8對常規(guī)培養(yǎng)條件下的FLS有直接的促增殖作用，并具有量效關(guān)系(在150ng/ml-250ng/ml的濃度范圍內(nèi)逐漸增強)。 我們通過RT-PCR的方法從原代培養(yǎng)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑膜成纖維細(xì)胞中克隆得到CXCR1的全長基因，測序正確后將其亞克隆入pTREhyg載體中。用脂質(zhì)體將pTet-on質(zhì)粒和CXCR1-pTREhyg

4、共轉(zhuǎn)染入NIH3T3細(xì)胞，以不同濃度的強力霉素誘導(dǎo)，用Westernblot檢測CXCR1蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示：我們所構(gòu)建的可調(diào)控性表達(dá)載體能在NIH3T3細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，不同濃度藥物誘導(dǎo)的CXCR1表達(dá)水平明顯不同；同時還觀察到IL-8刺激后，NIH3T3細(xì)胞中Erk-1/2磷酸化水平升高。 通過以上研究，我們得出初步結(jié)論：IL-8和CXCR1可能通過Erk等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子調(diào)控RA中FLS的增殖，最終參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生或發(fā)展