骨橋蛋白與乳腺癌臨床病理學(xué)特征關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景與目的: 骨橋蛋白（Osteopontin，OPN）是一種磷酸化糖蛋白趨化因子，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)骨橋蛋白在多種癌組織中過度表達(dá)，因此被認(rèn)為是一種能夠有效監(jiān)測(cè)腫瘤發(fā)展的標(biāo)記物。有研究認(rèn)為OPN是一種腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白，其在乳腺癌患者腫瘤組織中的高表達(dá)與乳腺癌的預(yù)后有關(guān)。本次實(shí)驗(yàn)我們分別通過RT-PCR和免疫組織化學(xué)法在基因和蛋白兩個(gè)水平檢測(cè)乳腺癌組織中OPN的表達(dá)，研究骨橋蛋白與乳腺癌臨床病理學(xué)特征之間

2、的關(guān)系，以期為進(jìn)一步研究OPN的作用及乳腺癌的發(fā)展提供支持。 研究方法: 收集2006年4月至2007年7月期間在山東大學(xué)附屬濟(jì)南中心醫(yī)院治療乳腺疾病的病例94例。其中66例原發(fā)性乳腺癌患者均經(jīng)乳腺癌改良根治術(shù)治療，其他則行乳腺腫塊單純切除術(shù)等治療。94例患者的平均年齡為49歲（33-72歲）。本實(shí)驗(yàn)采用反轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法和免疫組織化學(xué)染色方法分別在基因和蛋白水平檢測(cè)66例乳腺癌，37例正常乳腺組織

3、（距離癌組織>5cm）和28例良性乳腺腫瘤中OPN的表達(dá)。其中免疫組化的--抗采用山羊抗人單克隆抗體（mab53，Santa Cruz，美國(guó)）。OPN免疫組化染色結(jié)果判定根據(jù)Tuck等的半定量方法，對(duì)蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞的百分比（E）和陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度（Ⅰ）分別進(jìn)行評(píng)分。E：0=無；1=<1/100；2=1/100～1/10；3=1/10～1/3；4=1/3～2/3；5=>2/3。Ⅰ：0=無；1=輕度；2=中度；3=強(qiáng)染色，對(duì)染

4、色范圍和染色強(qiáng)度相加（I+E）作為總評(píng)分，0表示OPN陰性表達(dá)，2～8表示陽(yáng)性表達(dá)應(yīng)用腫瘤細(xì)胞染色強(qiáng)度（I）和染色范圍（E）來決定。乳腺鉬靶中的鈣化評(píng)價(jià)分別由三位對(duì)患者資料全無知曉的影像學(xué)專家進(jìn)行閱片。 研究結(jié)果: 用RT-PCR法檢測(cè)乳腺癌組織及乳腺良性腫瘤中的OPNmRNA表達(dá)指數(shù)分別為0．47±0．15和0．33±0．09，兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．01）。乳腺癌組織中c-erbB-2陽(yáng)性組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

5、的OPNmRNA表達(dá)指數(shù)分別高于c-erbB-2陰性組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組（P=0．015，P=0．004）。但是，乳腺癌組織學(xué)類型、腫瘤分級(jí)以及TNM分期均與OPNmRNA無關(guān)（P=0．14，P=0．073，P=0．47）?；颊甙l(fā)病的年齡、腫瘤大小以及腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目與OPNmRNA表達(dá)亦無相關(guān)關(guān)系（P>0．05）。42例伴有微鈣化的乳腺癌組織的OPNmRNA電泳條帶的亮度明顯大于無鈣化組。以β-actin作內(nèi)對(duì)照計(jì)算相對(duì)系數(shù)，鈣化組

6、和無鈣化組分別為0．52±0．15和0．40±0．14，其表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0，014）。鈣化數(shù)量和鈣化形態(tài)之間的OPNmRNA表達(dá)差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）。 用免疫組化方法分析95例腫瘤的OPN表達(dá)。乳腺癌組織中OPN的表達(dá)水平（4．83）明顯高于正常乳腺組織（1．86）和乳腺良性腫瘤（2．18）（P<0．01）；乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組之間OPN表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．048）。同樣

7、，乳腺癌原發(fā)灶中OPN的表達(dá)明顯高于相應(yīng)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的OPN表達(dá)（P=0．03）。OPN的表達(dá)與腫瘤組織學(xué)類型、腫瘤分級(jí)以及TNM分期無關(guān)（P=0．50，P=0．41，P=0．80）。乳腺癌c-erbB-2陽(yáng)性表達(dá)組OPN表達(dá)水平（5．22）高于c-erbB-2陰性組（4．00），但它們之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．056）。鈣化組OPN平均評(píng)分為5．24，較無鈣化組（4．11）明顯要高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．032），但是OPN

8、與鈣化的數(shù)量和類型無關(guān)（P>0．05）。 結(jié)論: 1、研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者的OPN表達(dá)在基因和蛋白水平均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和鈣化關(guān)系密切，而與腫瘤的組織學(xué)類型、腫瘤分級(jí)、TNM分期無關(guān)。患者發(fā)病年齡、原發(fā)腫瘤大小以及腋窩轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)目與OPN的表達(dá)亦沒有相關(guān)性。 2、OPN因其較好的靈敏度和特異性可能成為乳腺癌腫瘤標(biāo)志物。在乳腺癌患者中，OPN可以反映腫瘤負(fù)荷。我們需要進(jìn)行另外的前瞻性和回顧性研究，以便讓我們更好的了解