基于IL-6-STAT3-SOCS3通路研究清腸化濕方治療潰瘍性結(jié)腸炎作用機制.pdf

1、目的：本研究圍繞白細胞介素-6/Janus激酶2/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3/細胞因子抑制因子3(Interleukin-6/Janus kinase2/Signal transducer and activator of transcription3/Suppressor of cytokine signaling3，IL-6/STAT3/SOCS3)通路，觀察清腸化濕方對IL-6/STAT3/SOCS3通路及相關(guān)分子的調(diào)節(jié)，探討該方治

2、療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機制。
　　方法：體外實驗:予hTNF-α、LPS聯(lián)合刺激誘導(dǎo)HT-29細胞炎癥模型，將細胞隨機分為6組，對照組，模型組，柳氮磺胺毗啶(Sulfasalazine，SASP)組，清腸化濕方高劑量組、清腸化濕方中劑量組、清腸化濕方低劑量組。ELISA法檢測細胞上清液中IL-6的含量，Real TimePCR法檢測細胞JAK2、STAT3、SOCS3mRNA相對表達水平，Western Blot法檢測細胞p-JAK

3、2、p-STAT3、SOCS3蛋白的表達情況。體內(nèi)實驗:用TNBS/無水乙醇制備小鼠結(jié)腸炎模型，40只小鼠隨機分為對照組、模型組、SASP組、清腸化濕方組，連續(xù)給藥7d后，取新鮮結(jié)腸標本，觀察黏膜大體形態(tài)及組織學改變，ELISA法檢測可溶性白細胞介素6受體(soluble interleukin6 receptor，sIL-6R)含量，Real Time PCR法檢測IL-6、糖蛋白130(glycoprotein130,gp130)、

4、JAK2、STAT3、SOCS3mRNA相對表達水平，Western Blot法觀察結(jié)腸黏膜IL-6、gp130、p-JAK2、p-STAT3、SOCS3蛋白的表達情況。
　　結(jié)果：體外實驗:與對照組相比，模型組細胞上清IL-6水平、細胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表達水平增高，SOCS3 mRNA和蛋白表達增加。與模型組相比，清腸化濕方各劑量組細胞上清IL-6水平、p-JAK2、p-STAT3蛋白表達明顯降低(P＜0.01)

5、，呈劑量依賴性，清腸化濕方高、中劑量組SOCS3 mRNA和蛋白表達較模型組上調(diào)(P＜0.01)。各組JAK2、STAT3mRNA表達未見明顯差異(P＞0.05)。體內(nèi)實驗:清腸化濕方對模型小鼠結(jié)腸大體形態(tài)及病理學評分均有改善作用。與對照組相比，模型組結(jié)腸上清sIL-6R含量，結(jié)腸IL-6、gp130、SOCS3 mRNA和蛋白表達均明顯增高，p-JAK2、p-STAT3蛋白表達上調(diào)(P＜0.01)，清腸化濕方組sIL-6R含量，IL-

6、6、gp130mRNA和蛋白表達下調(diào)，p-JAK2、p-STAT3蛋白表達下調(diào)(P＜0.01)，SOCS3 mRNA和蛋白表達上調(diào)(P＜0.01)。各組JAK2、STAT3 mRNA表達未見明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：體外實驗結(jié)果表明清腸化濕方可能通過上調(diào)HT-29細胞SOCS3，抑制JAK2、STAT3的活化，降低IL-6的分泌。體內(nèi)試驗結(jié)果表明清腸化濕方對小鼠實驗性結(jié)腸炎有一定的改善作用，機制可能與上調(diào)SOCS3，抑