蘇木體外抗MRSA活性成分研究及細(xì)胞毒性評(píng)價(jià).pdf

1、目的：
　　1.提取分離豆科云實(shí)屬植物蘇木Caesalpinia sappan L.(Leguminosae)的有效成分。
　　2.探討單體化合物對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性，以及活性單體與臨床常用的抗菌藥物聯(lián)合用藥后抗MRSA的作用效果。
　　3.研究單體化合物對(duì)人肝細(xì)胞株HL-7702和肺癌細(xì)胞株A549的細(xì)胞毒性作用。
　　方法：
　　1.結(jié)合細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)，采用萃取、柱層析分

2、離等方法，對(duì)蘇木乙酸乙酯部位的分段產(chǎn)物進(jìn)行生物活性跟蹤篩選，對(duì)具有活性的片段進(jìn)一步分離純化得到單體化合物，結(jié)合現(xiàn)代波譜分析技術(shù)和理化方法鑒定其結(jié)構(gòu)。
　　2.對(duì)分離得到的5個(gè)單體化合物進(jìn)行抗 MRSA活性研究，采用微量稀釋法測(cè)定其最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，采用瓊脂紙片擴(kuò)散法篩選與單體化合物有聯(lián)合作用的抗生素，進(jìn)一步采用微量棋盤稀釋法和時(shí)間-殺菌曲線法測(cè)定化合物與所篩選出的抗生素的聯(lián)合作用效果。<

3、br>　　3.采用MTS法，通過(guò)測(cè)定吸光度(OD)值來(lái)評(píng)價(jià)化合物對(duì)人肝細(xì)胞株HL-7702和肺癌細(xì)胞株A549的細(xì)胞毒性作用。
　　結(jié)果：
　　1.從該植物中分離得到5個(gè)單體化合物：(1) Brazilin;(2)3-deoxysappanone B;(3) Potosappanin B;(4) Brazilein;(5) Potosappanin A。
　　2.藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示，MRSA菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類、環(huán)丙

4、沙星類等多種抗生素均耐藥，對(duì)萬(wàn)古霉素、利萘唑胺敏感。微量稀釋法結(jié)果顯示，化合物1對(duì)MRSA作用較強(qiáng)，MIC范圍為16~32μg/mL，MBC范圍為32~128μg/mL。另外4個(gè)化合物與化合物1相比，作用稍弱，MIC范圍為32~512μg/mL，MBC范圍為64~512μg/mL。
　　3.受試藥物與臨床常用抗生素聯(lián)合用藥的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：化合物1與4種常用氨基糖苷類抗生素聯(lián)合時(shí)均有明顯協(xié)同效果（FICI≤0.5），化合物4與阿奇霉

5、素聯(lián)合呈現(xiàn)協(xié)同作用，化合物2-5與慶大霉素或阿米卡星聯(lián)合使用呈現(xiàn)協(xié)同或相加作用，與青霉素類、頭孢類抗生素聯(lián)合時(shí)多為相加(0.5＜FICI≤1.0)和無(wú)關(guān)作用(1.0＜FICI≤2.0)，少見(jiàn)協(xié)同作用。隨機(jī)抽取的1株MRSA144繪制時(shí)間-殺菌曲線顯示，合用時(shí)log10CFU/mL比化合物或抗生素單用時(shí)明顯下降。
　　4.MTS法測(cè)定化合物細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物1、3、4、5對(duì)人肝細(xì)胞株 HL-7702和肺癌細(xì)胞株 A549的細(xì)