廣西莪術(shù)多糖生物活性與莪術(shù)醇免疫分析方法的研究.pdf

1、本學(xué)位論文以廣西道地藥材廣西莪術(shù)(Curcuma kwangsinensis S.G..Lee etC.F.Liang)為研究對(duì)象，對(duì)其中莪術(shù)多糖(CKP)調(diào)節(jié)血脂紊亂的生物活性及其機(jī)制、抗氧化作用進(jìn)行了研究；同時(shí)對(duì)其另一大類(lèi)成分揮發(fā)油中具有抗腫瘤活性的化合物莪術(shù)醇(Curcumol)，進(jìn)行單克隆抗體制備，并研究了莪術(shù)醇單克隆抗體在免疫分析方面的應(yīng)用，主要結(jié)果如下。
　　 將CKP高、中、低三個(gè)劑量組喂飼高脂血癥大鼠，以常用降血

2、脂藥物洛伐他汀做陽(yáng)性對(duì)照，三周后，測(cè)量給藥大鼠血清中的甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白AI(apoAI)、載脂蛋白B(apoB)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHPx)、超歧過(guò)氧化物酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量，結(jié)果顯示CKP對(duì)高脂血癥大鼠的血脂紊亂有明顯的改善作用，亦有明顯的抗氧化作用，作用效果與給藥劑量呈正相關(guān)。
　　 以脂滴包被蛋白(peri

3、lipin)和激素敏感酯酶(HSL)兩個(gè)生脂基因?yàn)榘谢?，以熒光PCR定量，分析CKP改善高脂大鼠血脂紊亂現(xiàn)象與生脂基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的規(guī)律與相關(guān)性。結(jié)果顯示給予CKP三個(gè)劑量組的高脂大鼠脂肪組織HSL基因表達(dá)量都升高，而對(duì)于perilipin基因，其表達(dá)量均降低；CKP三個(gè)劑量組血清中的TG與HSL基因表達(dá)呈顯著的負(fù)相關(guān)(P<0.05)；與perilipin的基因表達(dá)呈顯著的正相關(guān)(P<0.05)。
　　 以4-二甲基氨基吡啶(DM

4、AP)做催化劑，莪術(shù)醇與丁二酸酐為反應(yīng)物得到的莪術(shù)醇丁二酸單酯半抗原，再行碳化二亞胺(EDC)法與載體蛋白偶聯(lián)合成的莪術(shù)醇完全抗原，具有很好的免疫原性，可作為免疫原應(yīng)用于莪術(shù)醇單克隆抗體的制備。該合成方法反應(yīng)條件溫和、步驟簡(jiǎn)單、質(zhì)量穩(wěn)定且合成產(chǎn)物收率高，產(chǎn)率為87％。
　　 應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備出了能夠高度分泌抗莪術(shù)醇的單克隆抗體的細(xì)胞株，經(jīng)腹水制備、ProteinG瓊脂糖凝膠親和色譜柱純化，可得到含量在90％以上的抗莪術(shù)醇的單克

5、隆抗體。對(duì)抗體進(jìn)行類(lèi)型判斷、效價(jià)、靈敏度、親和常數(shù)、交叉反應(yīng)率等的特征鑒定與評(píng)價(jià)，顯示抗體的效價(jià)高(106以上)，親和性好(親和常數(shù)2.45×10-8)，特異性強(qiáng)。
　　 初步建立了莪術(shù)醇ELISA分析方法，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，顯示該方法的線性(0.16-11μg.ml-1)、重現(xiàn)性(9.02％)、精密度(<9％)、加樣回收率(10.01％)、板間(<10％)板內(nèi)(<10％)差異程度符合免疫分析要求，最低檢測(cè)限為78ng.ml-