莪術(shù)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)，揮發(fā)油、多糖分離及其多糖生物學(xué)活性研究.pdf

1、本研究建立了高產(chǎn)細(xì)胞懸浮系,是以莪術(shù)黃色、疏松愈傷組織細(xì)小顆粒為實(shí)驗(yàn)材料,將其接種于不同種類培養(yǎng)基,在不同碳源、氮源、激素種類及濃度、pH值、搖床轉(zhuǎn)速、接種量、繼代周期、光暗培養(yǎng)周期等不同條件下,培養(yǎng)一定時(shí)期后離心收獲細(xì)胞,利用水蒸汽法測(cè)揮發(fā)油含量,苯酚—硫酸法測(cè)多糖含量.在揮發(fā)油的合成調(diào)控中,進(jìn)行了乙酸銨、乙酸鉀、泛酸鈣等前體物質(zhì)及能量物質(zhì)ATPNa<,2>添加的調(diào)控研究.確立了有利于莪術(shù)細(xì)胞生長(zhǎng)及多糖和揮發(fā)油合成的最佳培養(yǎng)條件.結(jié)果

2、表明,在最佳培養(yǎng)條件下,莪術(shù)細(xì)胞生長(zhǎng)量是未優(yōu)化培養(yǎng)對(duì)照組的1.82倍;懸浮細(xì)胞中多糖和揮發(fā)油含量大大提高了,分別可達(dá)45.53％和2.62％.其中多糖含量是飲片多糖含量的1.37倍,揮發(fā)油含量是未優(yōu)化培養(yǎng)對(duì)照組的1.71倍.這方面的研究未見報(bào)道.本研究為工業(yè)化生產(chǎn)提供有意義的理論依據(jù).在莪術(shù)多糖的生物學(xué)活性研究中,采用熱水浸提法從莪術(shù)飲片粉末浸提得粗多糖,經(jīng)醇析、濃縮、DEAE-52纖維素柱層析,經(jīng)蒸餾水、NaCl溶液梯度洗脫純化后,利

3、用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行純度檢測(cè),得—水洗脫組分,用該組分進(jìn)行動(dòng)物活體內(nèi)抗腫瘤、免疫及體內(nèi)外抗氧化研究.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:莪術(shù)飲片多糖含量為33.12％.莪術(shù)多糖具有體內(nèi)抗H<,22>腹水癌的實(shí)體瘤作用,劑量為500mg·kg-1·day-1的抑瘤率高達(dá)54.87％,并能提高小鼠的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、脾指數(shù)及血液中SOD酶活力;體外具有抗羥自由基氧化的能力,多糖濃度為100mg/mL時(shí),對(duì)羥自由基的清除率達(dá)36.56％.莪術(shù)多糖可能是通過提高小鼠的