CD133分子在兒童B系急性淋巴細(xì)胞白血病表達(dá)的意義及其生物學(xué)特性的初步研究.pdf

1、一、兒童B系急性淋巴細(xì)胞白血病CD133分子表達(dá)的意義
　　 目的：探討急性淋巴細(xì)胞性白血病(AcutelymphoblasticleukemiaALL)患兒誘導(dǎo)化療前后骨髓單個(gè)核細(xì)胞CD133-1、CD133-2兩種分子的表達(dá)與臨床預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性。
　　 方法：選取初診ALL患兒59例，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其骨髓單個(gè)核細(xì)胞CD133-1和CD133-2的表達(dá)比例。
　　 結(jié)果：1）初診B-ALL患幾CD133-1、

2、CD133-2的表達(dá)與其年齡、性別、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓幼稚細(xì)胞比例、LDH水平、細(xì)胞遺傳學(xué)改變、融合基因、危險(xiǎn)等級(jí)、完全緩解(CR)率及白細(xì)胞分化抗原CD38、CD58和CD66c等表達(dá)均無相關(guān)性(P＞0.05)（其中4例T-ALL因例數(shù)太少，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。2）55例B-ALL中，CD133-1表達(dá)陽性者21例（占38.2％），CD133-2表達(dá)陽性30例（占54.5%），二者表達(dá)陽性比例有顯著差異(P＜0.05)。3)B-ALL

3、組CD133兩種亞型分子的表達(dá)與CD34表達(dá)雖然有顯著性差異(P＜0.05)，但無相關(guān)性(P＞0.05)；
　　 結(jié)論：1）初診B-ALL患兒CD133-1、CD133-2的表達(dá)與其性別、年齡、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓幼稚細(xì)胞比例、LDH水平、危險(xiǎn)等級(jí)、融合基因、細(xì)胞遺傳學(xué)改變、CR率、CD38、CD58、及CD66c等表達(dá)均無相關(guān)性。2）B-ALL患兒CD133-2的表達(dá)比例明顯高于CD133-1。3）CD133表達(dá)與CD34表

4、達(dá)無相關(guān)性。
　　 二、兒童B系A(chǔ)LL來源的CD133+細(xì)胞生物學(xué)特性的初步研究
　　 目的：體外分離兒童B-ALL原代白血病細(xì)胞CD133+CD19+、CD133+CD19-等亞群細(xì)胞，初步探討其體外生物學(xué)特性。
　　 方法：選取4例CD133表達(dá)陽性的B-ALL患兒，經(jīng)免疫磁珠法(MACS)分選出CD133+CD19+與CD133+CD19-細(xì)胞，并用流式細(xì)胞儀對(duì)所分選細(xì)胞的CD133-2表達(dá)進(jìn)行鑒定；分選后

5、的CD133+CD19+與CD133+CD19-兩組亞群細(xì)胞，分別接種于含干細(xì)胞因子(SCF)、白細(xì)胞介素-3(IL-3)和白細(xì)胞介素-7(IL-7)的無血清培養(yǎng)基中，懸浮培養(yǎng)4-7周后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的CD133、CD19及CD34的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)其融合基因的表達(dá)。同時(shí)以MACS分選的CD133-細(xì)胞作對(duì)照。
　　 結(jié)果：1）MACS法分選B-ALL原代白血病CD133+CD19+與CD133+CD19-兩組亞

6、群細(xì)胞，分選后細(xì)胞總回收數(shù)為（76.9±25.63）×106，較分選前細(xì)胞總數(shù)[（99.0±21.07）×106]低，細(xì)胞總回收率為77.7%，但二者之間無顯著差異(P＞0.05)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所分選的細(xì)胞的CD133-2表達(dá)比例，示兩者平均比例分別為(77.5±13.61)%、(76.83±5.58)%。2）CD133+CD19+、CD133+CD19-兩組亞群細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)平均5周（4-7周），細(xì)胞生長(zhǎng)良好，可形成克

7、隆細(xì)胞球；通過在4個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)（d0、d14、d28、培養(yǎng)結(jié)束前）對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，提示CD133+CD19+亞群細(xì)胞增殖速度更快，且培養(yǎng)至14天左右細(xì)胞即進(jìn)入增殖高峰期，上述4個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而CD133-CD19+、CD133-CD19-兩組原代細(xì)胞亞群則未形成克隆細(xì)胞球，且細(xì)胞增殖緩慢，1周內(nèi)無明顯細(xì)胞增殖，以后逐漸凋亡。3）CD133+CD19+、CD133+CD19-兩組亞群細(xì)胞經(jīng)體外無血清培

8、養(yǎng)4-7周后，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，CD133、CD19及CD34均無表達(dá)。4）2例初診時(shí)有融合基因表達(dá)異常（分別TEL/AML1、MLL/AF4表達(dá)陽性）的B-ALL患兒，分別經(jīng)無血清培養(yǎng)5、7周后融合基因仍表達(dá)陽性。
　　 結(jié)論：1）免疫磁珠分選技術(shù)能夠成功分離純化兒童B-ALL中CD19+CD133+與CD133+CD19-兩組亞群細(xì)胞；2）含不同細(xì)胞因子的無血清培養(yǎng)基能有效支持B-ALL的CD133+細(xì)胞體外中、長(zhǎng)期培養(yǎng)并維