自體骨膜細(xì)胞-藻酸鈣凝膠載體復(fù)合體修復(fù)骨缺損的定量分析研究.pdf

1、目的：由于腫瘤、炎癥、外傷和發(fā)育異常等導(dǎo)致的骨缺損在臨床上極為常見，骨缺損自身修復(fù)能力較低，只能修復(fù)有限大小的骨缺損，自體、異體骨移植作為修復(fù)骨缺損最常用的方法，存在著諸多不足：來源有限、供區(qū)結(jié)構(gòu)破壞、功能受影響、具有免疫原性、傳染疾病等，目前開發(fā)的骨替代材料距理想的目標(biāo)還有很大距離。骨缺損的治療一直是骨科領(lǐng)域不斷深入研究的課題。組織工程學(xué)的發(fā)展為這一難題提供了新的思路和方法。骨組織工程學(xué)的研究內(nèi)容主要包括：種子細(xì)胞、可降解的生物材料、

2、骨生長相關(guān)因子。藻酸鈣凝膠是一種理想的組織工程支架材料，藻酸鈣凝膠在電鏡下掃描為三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其作為細(xì)胞載體具有以下特點(diǎn)：良好的力學(xué)性能、化學(xué)穩(wěn)定性、低毒性、低致熱源性、低免疫反應(yīng)性、確定的空隙率和空隙間距、與細(xì)胞有良好的相容性并且操作可一步完成，同時(shí)，它能為細(xì)胞生長建立良好的三維空間結(jié)構(gòu)，有利于氧和營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行交換并排出廢物，從而具有良好的骨傳導(dǎo)作用。骨膜含有成骨細(xì)胞、骨原細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等，大量實(shí)驗(yàn)證明骨膜來源的成骨細(xì)胞成骨能力強(qiáng)，

3、是較好的種子細(xì)胞提供物。骨膜中及骨損傷局部分泌豐富的轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)和骨形態(tài)生發(fā)蛋白(BMP)，具有刺激骨膜細(xì)胞分化和骨膜成骨的作用。藻酸鈣凝膠與自體骨膜細(xì)胞如何配比才能達(dá)到最佳骨骼生長狀態(tài)，是實(shí)驗(yàn)過程中亟待解決的難題。本實(shí)驗(yàn)在總結(jié)前人研究經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察自體骨膜細(xì)胞—藻酸鈣凝膠復(fù)合體在動(dòng)物機(jī)體中的成骨情況，并初步探討藻酸鈣凝膠與骨膜細(xì)胞的最佳配比。 方法：健康成年新西蘭白兔96只，隨機(jī)分成六組，即A、B、C、

4、D、E、F組(其中A、B、C、D、E組為試驗(yàn)組，F(xiàn)組為對(duì)照組)，每組16只。手術(shù)造成雙側(cè)橈骨15mm標(biāo)準(zhǔn)骨缺損模型，將取下的雙側(cè)橈骨骨膜銳性剝離后剪成碎片，混入5ml的1640液中，用細(xì)胞懸液制備器將混合液制成細(xì)胞懸液，800轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘濃集細(xì)胞，將A、B、C、D、E組沉淀的細(xì)胞分別與藻酸鈉溶液充分混勻，體積約為0.4ml(約等于骨缺損體積)，置于模型中，調(diào)節(jié)A、B、C、D、E組細(xì)胞數(shù)為總數(shù)的1、1/4、1/16、1/64、1/2

5、56，滴加葡糖酸鈣使溶液變成凝膠，并植入自體右側(cè)橈骨缺損模型處。于術(shù)后2、4、8、12周每組隨機(jī)處死動(dòng)物4只，將標(biāo)本仔細(xì)去除肌肉后進(jìn)行大體觀察、X-線檢查、組織學(xué)觀察，同時(shí)測定血清堿性磷酸酶(ALP)、血清鈣水平。 結(jié)論： 1.自體骨膜細(xì)胞懸液—藻酸鈣凝膠復(fù)合體在自體內(nèi)成骨作用良好，修復(fù)骨缺損效果滿意，且操作簡便，易于臨床掌握和應(yīng)用。 2.藻酸鈣凝膠具有良好的組織相容性、表面活性、生物降解性和可塑形性，是一種良好