針刺百會和足三里穴對腦缺血再灌注損傷大鼠炎癥機制的研究.pdf

1、研究目的
　　 在前期研究基礎(chǔ)上，采用大腦中動脈線栓法制備腦缺血再灌注損傷(cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI)大鼠模型，檢測中樞雙側(cè)相關(guān)腦區(qū)炎癥損傷信號鏈中的炎性細胞因子白細胞介素(IL)-1β、IL-6和腫瘤壞死因子(TNF)-α及外周血中的IL-1β、IL-6、TNF-α和損傷應(yīng)激信號熱休克蛋白(HSP)70表達的變化，探討針刺百會和足三里穴對腦缺血再灌注損傷炎癥機制的干預(yù)作

2、用。
　　 實驗方法
　　 大鼠隨機分為針刺組、模型組和假手術(shù)組，每組再根據(jù)再灌注后時間分成12h、24h、48h、72h、96h和144h6個時間點，每個時間點8只大鼠，另設(shè)正常對照組大鼠8只；以右側(cè)大腦中動脈線栓法制備腦缺血再灌注損傷模型，針刺組為造模成功后在規(guī)定時間內(nèi)針刺百會和足三里穴。
　　 分別應(yīng)用TTC染色法驗證模型及提供實驗定位標記，應(yīng)用HE染色觀察細胞的形態(tài)類型；應(yīng)用免疫組織化學技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附

3、測定法(ELISA)分析中樞雙側(cè)腦區(qū)及外周血中炎性細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和損傷應(yīng)激蛋白HSP70表達的變化。
　　 實驗結(jié)果
　　 1．TTC染色：腦組織大腦中動脈供血區(qū)域，可見到白色的梗死灶，與鮮紅色的正常腦組織形成對比；且視交叉前后的腦片梗死灶較穩(wěn)定。這為我們下一步研究腦缺血中樞炎癥機制提供較好的實驗定位標記。
　　 2.HE染色：損傷核心區(qū)的病理損傷高峰時間出現(xiàn)在腦缺血后48h，72h后水

4、腫減輕，膠質(zhì)細胞和膠原纖維增生，大量新生血管出現(xiàn)，96h最為明顯。
　　 3．ELISA結(jié)果分析：
　　 1)IL-1β在腦缺血模型組大鼠外周血清中呈雙峰形表達，峰值時間為24h和96h;在針刺組大鼠各個時間點外周血清中表達下調(diào)，以24h組最顯著；在假手術(shù)組24h組最高。
　　 2)IL-6在各組大鼠外周血清中表達顯示：假手術(shù)組呈雙峰形表達，峰值時間在24h和72h;模型組的表達高于正常對照組；針刺組呈單谷型分布

5、，谷值時間為48h，且針刺組表達低于模型組和假手術(shù)組；各組大鼠外周血清IL-6的表達均高于正常對照組。
　　 3)TNF-α在各組大鼠外周血清中均呈單峰形表達，模型組和針刺組的峰值時間均為24h，但針刺組各個時間點表達低于模型組；各組的TNF-α表達均高于正常對照組。
　　 4)HSP70在各組大鼠外周血清中的表達均較正常組高，模型組及假手術(shù)組峰值時間均為12h;針刺組表達的峰值時間在24h，72h后表達降至基線水平，且

6、表達量低于模型組和假手術(shù)組。
　　 4．免疫組化染色：
　　 1)IL-1β在腦缺血大鼠患側(cè)缺血腦區(qū)呈雙峰表達，模型組峰值時間為48h和96h，針刺組為24h和72h，且針刺組表達量顯著低于模型組，但高于假手術(shù)組和正常對照組；健側(cè)非缺血腦區(qū)的表達高于正常對照組和假手術(shù)組。
　　 2)IL-6在患側(cè)缺血腦區(qū)呈單峰表達，模型組峰值時間為96h，針刺組為72h，針刺組表達量顯著低于模型組，但高于假手術(shù)組和正常對照組；健

7、側(cè)腦區(qū)IL-6表達高于正常對照組和假手術(shù)組。
　　 3)TNF-α在患側(cè)缺血腦區(qū)呈單峰表達，模型組和針刺組峰值時間均為72h，針刺組表達量顯著低于模型組，但高于假手術(shù)組和正常對照組；健側(cè)非缺血腦區(qū)的表達均低于患側(cè)缺血腦區(qū)，但高于正常對照組和假手術(shù)組。
　　 結(jié)論
　　 1．針刺百會和足三里穴可抑制中樞損傷腦區(qū)損傷相關(guān)的炎性細胞因子表達，促進損傷-修復(fù)相關(guān)的細胞因子表達，使修復(fù)時相前移，加速損傷修復(fù)。
　　

8、 2．針刺百會和足三里穴對機體宏觀生理功能調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的影響可能是通過對損傷對側(cè)和全身的功能調(diào)節(jié)，降低免疫系統(tǒng)對中樞局部腦組織損傷的炎癥應(yīng)答，促進損傷修復(fù)信號鏈活化。
　　 創(chuàng)新點
　　 以線栓法制備經(jīng)典的腦缺血再灌注損傷大鼠模型，根據(jù)再灌注后時間分別取12h、24h、48h、72h、96h和144h6個時間點，探討針刺百會、足三里穴對腦缺血再灌注損傷大鼠中樞雙側(cè)腦區(qū)炎性細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達，及外周