MiR-194在胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理資料的關(guān)系.pdf

1、目的:微小RNA(miRNA)為一類在動植物中廣泛存在的非編碼核苷酸,由19～22個(gè)核苷酸構(gòu)成,其表達(dá)具有組織特異性和時(shí)序特異性。1993年,Lee首次在秀麗隱干線蟲(Caenorhabditis elegans)中發(fā)現(xiàn)了這種miRNA。其的成熟體可以與靶mRNA的3’-非翻譯區(qū)互補(bǔ)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平上抑制靶基因的表達(dá)。迄今,已發(fā)現(xiàn)了數(shù)百種miRNA。miRNA參與了生命過程中一系列的重要過程包括早期發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化、凋亡、死亡,脂

2、肪代謝。研究表明,MicroRNAs與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著密切的聯(lián)系,若干miRNA直接參與消化器官(包括肝、結(jié)腸、胰腺、胃、膽管)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。并與病理分級、臨床分期、耐藥性、診斷、治療和預(yù)后等密切相關(guān)。
　　 目前,圍繞胃癌的miRNA的研究已經(jīng)展開并不斷深入。很多應(yīng)用芯片技術(shù)和生物信息學(xué)方法的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些與胃癌密切相關(guān)的miRNAs。研究顯示,92％的胃癌樣本中,miR-21呈顯著的高表達(dá),提示miR-21可能作

3、為有效的胃癌診斷標(biāo)志。Motoyama K等的深入研究證實(shí),在胃癌中,let-7與HMGA2呈負(fù)相關(guān),而HMGA2在胃癌中高表達(dá)狀態(tài),且與腫瘤的侵襲能力及患者的預(yù)后正相關(guān),因此,let-7可能是通過負(fù)性調(diào)控HMGA2來發(fā)揮其在胃癌中的作用。其他的相關(guān)研究證實(shí),人工miRNA可能抑制癌細(xì)胞腫瘤相關(guān)的基因表達(dá),從而影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。
　　 本實(shí)驗(yàn)研究中,經(jīng)參考國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)確定miR-194為研究的重點(diǎn)。利用定量real-t

4、ime PCR技術(shù)檢測了胃癌組織相對于癌遠(yuǎn)端非癌組織中miR-194的表達(dá),并分析miR-194表達(dá)水平與臨床病理資料(性別、年齡、癌灶大小、病變位置、大體分型、組織學(xué)分級、pT分期、pTNM分期及淋巴管轉(zhuǎn)移等臨床病理資料)間的聯(lián)系,初步探索其在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮的作用。
　　 方法:
　　 一、MiR-194在胃癌組織中的表達(dá)
　　 本實(shí)驗(yàn)收集了119例臨床病人的胃癌及周圍非癌組織,經(jīng)提取總RNA,加尾,抽

5、提、純化,反轉(zhuǎn)錄后得到cDNA模板,運(yùn)用定量real-time PCR檢測miR-194在胃癌組織中相對于癌旁非癌組織的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)以U6基因的表達(dá)為內(nèi)參計(jì)算miR-194的相對表達(dá)量。U6為管家基因,它的表達(dá)量相對于其他基因的表達(dá)是相對恒定的。然后使用2-△△CT公式的方法計(jì)算出miR-194在癌組織相對于癌旁非癌組織表達(dá)量。如果相對表達(dá)量小于1,則被認(rèn)為是低表達(dá)。反之,被認(rèn)為是高表達(dá)。然后,運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析miR-194與臨床病理

6、資料之間是否存在相關(guān)性。
　　 二、MiR-194在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)
　　 使用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)了3種胃癌細(xì)胞系:SGC-7901,MGC-803和BGC-823,并提取三種細(xì)胞的總RNA,并最終得到cDNA。在胃癌癌旁非癌組織中隨機(jī)選取了7例非癌組織做為陰性對照,運(yùn)用Real-time PCR實(shí)驗(yàn),檢測miR-194在三種胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。并通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析研究在胃癌細(xì)胞系和癌旁非癌組織之間是否存在著m

7、iR-194的表達(dá)水平的差異。
　　 結(jié)果:
　　 一、MiR-194在胃癌組織中的表達(dá)
　　 在人胃癌組織及與其配對的周圍非癌組織之間未發(fā)現(xiàn)miR-194顯著差異性表達(dá),其中占50.42％的病例miR-194的表達(dá)水平低于配對的癌周非癌組織,而49.58％miR-194在癌組織中的的表達(dá)水平高于配對的癌周非癌組織(p=0.558)。
　　 二、MiR-194表達(dá)水平與胃癌臨床病理資料的關(guān)系
　　

8、 在胃癌病例中,miR-194表達(dá)水平與腫瘤大小、浸潤深度(pT分期)和大體分型三種臨床病歷資料之間存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)聯(lián)系:MiR-194低水平表達(dá)的病例通常表現(xiàn)出腫瘤生長得更大和對胃壁的浸潤程度更深(pT分級)的特點(diǎn)。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,還得出在BorrmannⅣ型胃癌病例中miR-194的表達(dá)水平顯著低于BorrmannⅠ,Ⅱ和Ⅲ型胃癌。
　　 二、MiR-194在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)
　　 在對三種胃癌細(xì)胞表達(dá)水平的研究中發(fā)現(xiàn)

9、miR-194在MGC-803細(xì)胞系,BGC-823細(xì)胞系和SGC-7901細(xì)胞系中的表達(dá)水平顯著低于隨機(jī)選取的7例非癌組織中該miRNA的表達(dá)水平。在三種細(xì)胞系中miR-194的表達(dá)量均低于非癌組織中表達(dá)量的1/1000倍。
　　 結(jié)論:
　　 1、在119例胃癌組織中MiR-194在癌組織和癌旁非癌組織之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的表達(dá)水平的差異。
　　 2、miR-194表達(dá)水平與胃癌臨床病歷資料中的大小、及浸潤深