核苷酸切除修復(fù)基因多態(tài)性與肝癌遺傳易感性及臨床表型的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、【研究背景和目的】 乙型肝炎病毒(HBV)感染和黃曲霉毒素B<,1>(AFB<,1>)攝入是我國原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)病的兩大主要危險(xiǎn)因素。此外，吸煙、飲酒和遺傳背景等因素也可能影響疾病的發(fā)生。 國內(nèi)的流行病學(xué)調(diào)查和研究結(jié)果顯示，與HCC低發(fā)區(qū)比較，在高發(fā)區(qū)，糧食受AFB<,1>污染的程度更嚴(yán)重，同時(shí)當(dāng)?shù)鼐用裱錋FB<,1->白蛋白加合物的水平也顯著增高。AFB<,1>在體內(nèi)經(jīng)Ⅰ相代謝酶活化為AFB<,1>-8,9

2、-環(huán)氧化物，該致癌物與DNA上鳥嘌呤(dG)的N<'7>特異性結(jié)合，經(jīng)過一系列反應(yīng)后，形成AFB<,1>-N<'7>-dG和AFB<,1>-FAPY兩種大加合物，導(dǎo)致DNA發(fā)生G>T堿基顛換等多種突變和損傷，并強(qiáng)烈抑制DNA的復(fù)制。這種損傷是基因突變和細(xì)胞癌變的分子基礎(chǔ)。而核昔酸切除修復(fù)(NER)通路被認(rèn)為是機(jī)體內(nèi)修復(fù)AFB<,1>所致DNA損傷的最主要途徑。 NER通路主要基因有：①DNA損傷的識別：涉及XPA、XPC等基因；

3、②損傷部位DNA鏈的打開：由TFIIH的亞基ERCC3/XPB和ERCC2/XPD解旋酶打開DNA雙鏈；③寡核苷酸鏈的切斷：XPG和XPF-ERCC1復(fù)合體分別在損傷部位的3’端和5’端切斷DNA單鏈；④PCNA、RPA等基因完成缺損部位單鏈片段的再合成和修補(bǔ)缺口。其中，損傷的識別/切除是通路中的限速或調(diào)節(jié)環(huán)節(jié)。在通路中，各個(gè)基因發(fā)揮著相應(yīng)的獨(dú)特作用，并按照嚴(yán)格的順序加入和置換出NER過程，其中任何一個(gè)基因的功能異常即可導(dǎo)致整個(gè)通路對損

4、傷修復(fù)的效率。 研究顯示，基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)是導(dǎo)致不同個(gè)體對復(fù)雜疾病的易感性和對藥治療的敏感性等出現(xiàn)差異的最基本分子基礎(chǔ)和最主要表現(xiàn)形式。SNP不但與腫瘤的易感性有顯著性關(guān)聯(lián)，用于判斷疾病的患病風(fēng)險(xiǎn)，還與腫瘤的療效及患者預(yù)后顯著相關(guān)，能作為反映疾病進(jìn)展以及預(yù)后的重要指標(biāo)。同樣，NER基因的單核苷酸多態(tài)性是個(gè)體DNA損傷修復(fù)能力差異的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)，可影響個(gè)

5、體的腫瘤易感性和腫瘤患者的預(yù)后。目前，已在肺癌等腫瘤的病例一對照研究中，發(fā)現(xiàn)了XPD等NER基因的多態(tài)性與腫瘤的易感性以及患者化療后的預(yù)后等顯著相關(guān)。但在NER基因多態(tài)性與肝癌易感性的關(guān)聯(lián)研究方面，目前在國內(nèi)外僅檢索到2篇文獻(xiàn)報(bào)道，這兩項(xiàng)研究檢測的位點(diǎn)均是XPD Lys751Gln，均未發(fā)現(xiàn)此位點(diǎn)的多態(tài)性與HCC的易感性存在顯著性關(guān)聯(lián)。NER通路其他基因的多態(tài)性與肝癌的易感性、臨床表型及預(yù)后的關(guān)系均未見報(bào)道。在前期的研究中，本研究小組建

6、立了SNP發(fā)掘、分型和遺傳分析的技術(shù)平臺，對100多個(gè)與HCC等疾病相關(guān)的候選基因進(jìn)行了大規(guī)模重測序。在此基礎(chǔ)上我們初步確定了NER通路中6個(gè)基因共11個(gè)位點(diǎn)(ERCCl C8092A、ERCCl Asn118Asn、XPA 3’UTR、XPA G-4A、XPC G-5A、XPC Intron 9 PAT、XPD Asp312Asn、XPD Lys751Gln、XPF T26523C、XPG His46His和XPG His1104As

7、p(最小等位頻率均超過5％)，分析這些位點(diǎn)的多態(tài)性與中國廣西人群HCC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，并初步探討這些多態(tài)性與HCC臨床表型及疾病進(jìn)展(如TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、門靜脈侵犯等)的關(guān)聯(lián)性，以期闡明NER基因多態(tài)性在HCC發(fā)生和疾病進(jìn)展中所起的作用。 【結(jié)論】 1．本研究是首個(gè)對整個(gè)NER通路中涉及的主要基因的多態(tài)性與HCC的遺傳易感性和臨床表型進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析的研究。其中在易感性關(guān)聯(lián)研究方面，除了XPD Lys751Gln外，其他

8、位點(diǎn)的多態(tài)性與HCC易感性的關(guān)系尚未見文獻(xiàn)報(bào)道；而NER基因多態(tài)性與HCC臨床表型的關(guān)聯(lián)研究亦未見報(bào)道。 2．在調(diào)整了HBV感染狀態(tài)，以及經(jīng)過多因素校正和Bonferroni Correction校正后，本研究中11個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)各基因型的頻率在HCC組和對照組間的差異均無顯著性。說明各基因型作為單因素時(shí)，其與HCC的遺傳易感性均無顯著性關(guān)聯(lián)。 3．HBV感染狀況對NER基因多態(tài)性與HCC易感性的關(guān)系有明顯影響。其中，HB

9、V感染能顯著增強(qiáng)NER基因各多態(tài)性與環(huán)境因素的交互作用，共有8個(gè)基因的15個(gè)基因型與環(huán)境因素有顯著交互作用，影響個(gè)體的HCC患病風(fēng)險(xiǎn)。 4．不管是否合并有HBV感染，隨著攜帶的NER基因風(fēng)險(xiǎn)性基因型數(shù)目的增多，個(gè)體罹患HCC的風(fēng)險(xiǎn)均顯著增高。 5.XPD Lys751Gln和Asp312Asn的突變基因型的頻率在我國大陸人群中低于臺灣人群和白色人種的頻率，有顯著的種族特異性。 6．NER基因多態(tài)性還與HCC 臨床