金水寶膠囊影響實(shí)驗(yàn)性慢性支氣管炎ET-1和NO的機(jī)制研究.pdf

1、目的：金水寶膠囊(每粒含蟲草菌粉0.33g)系冬蟲夏草分離所得蟲草菌的發(fā)酵制品。冬蟲夏草甘溫，入肺、腎經(jīng)，具有補(bǔ)腎保肺、秘精益氣之功效，對(duì)慢性支氣管炎(chronicbronchitis，CB)具有較好的治療效果，但其治療作用機(jī)制尚未完全明確。本研究采用氣管內(nèi)滴注脂多糖(LPS)的方法復(fù)制CB大鼠模型，然后給予藥物干預(yù)，檢測大鼠血漿(清)、肺組織中ET-1、NO的含量，運(yùn)用HE染色和SP免疫組織化學(xué)染色等技術(shù)手段，觀察CB狀態(tài)下支氣管、

2、肺組織病理形態(tài)學(xué)特征及金水寶膠囊對(duì)肺組織中cNOS表達(dá)的影響，初步探討其作用機(jī)理。 方法：SD大鼠50只，按體重隨機(jī)分為CB模型組(簡稱“模型組”，model group)、金水寶低劑量組(簡稱“金低組”，low-dose group)、金水寶高劑量組(簡稱“金高組”，high-dose group)和桂龍咳喘寧對(duì)照組(簡稱“桂龍組”，guilonggroup，陽性對(duì)照用藥)，并設(shè)不加處理的正常對(duì)照組(簡稱“正常組”，norma

3、l group)。每組10只，雌雄各半。 造模各組大鼠用1％的戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射，麻醉成功后，使其仰臥固定于操作臺(tái)，暴露聲門，以靜脈套管針代替氣管導(dǎo)管，拔除針芯，快速插入氣管，將LPS 200μg注入氣管內(nèi)；正常組大鼠氣管內(nèi)滴入無菌生理鹽水0.5ml/只。喂養(yǎng)3周。 造模成功后，正常組和模型組灌服生理鹽水，10ml/kg；金低組和金高組每日用藥劑量分別為0.3g/kg(相當(dāng)于臨床成人用藥量的7倍)、

4、0.6g/kg(相當(dāng)于臨床成人用藥量的14倍)，以0.03g/ml和/或0.06g/ml的混懸液灌胃；桂龍組每日用藥劑量0.9g/kg(相當(dāng)于臨床成人用藥量的14倍)，以0.09g/ml的混懸液灌胃。以上均為每日1次，連續(xù)3周。 檢測樣本制備：灌藥3周結(jié)束后第2天，斷頭取血，立即以3500r/min離心5min，分離血漿，并取血清，-20℃凍存待檢。 肺組織勻漿的制備：將肺組織用冰生理鹽水沖洗，濾紙吸濕后，稱取濕重0.3

5、g左右，加入預(yù)冷的生理鹽水，用電動(dòng)勻漿器研磨，鏡檢未見完整細(xì)胞，制成10％的肺組織勻漿。4℃6000r/min離心5min，提取上清液，用雙縮脲法測定蛋白含量，-20℃凍存待檢。 取右側(cè)肺臟中部組織0.5cmx0.5cm，用10％甲醛(pH7.4磷酸鹽緩沖液配制)固定，常規(guī)石蠟包埋，切片。 結(jié)果： 1 CB大鼠支氣管、肺組織病理形態(tài)學(xué)改變正常組可見細(xì)支氣管粘膜上皮完整，細(xì)胞排列整齊，細(xì)支氣管壁及肺泡無明顯病理形態(tài)

6、學(xué)改變(見Fig.1～3)。模型組可見細(xì)支氣管管腔增大，部分上皮細(xì)胞壞死脫落，周圍可見大量以淋巴細(xì)胞為主的慢性炎細(xì)胞浸潤。肺泡上皮細(xì)胞部分壞死脫落，肺泡間隔明顯增寬，伴有慢性炎細(xì)胞及少量剛t-性粒細(xì)胞浸潤等(見Fig.4～6)。 2 金水寶膠囊對(duì)CB大鼠血漿(清)和肺組織中ET-1和NO含罱的影響 2.1金水寶膠囊對(duì)CB大鼠血漿和肺組織中ET-1含量的影響結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠血漿、肺組織中ET-l含量均明

7、顯升高(P<0.01)；與模型組比較，金高組、桂龍組血漿和肺組織中.ET-1含量均明顯降低(P<0.01)，金低組肺組織中ET-1含量也明顯降低(P<0.01)，而血漿中未見顯著性差異(P>0.05)；與金低組比較，金高組、桂龍組血漿和肺組織中.ET-1含量均明顯降低(P<0.05或P<0.01)：與金高組比較，桂龍組血漿中ET-1含量明顯降低(P<0.05)，肺組織中未見顯著性差異(p>0.05)。見Fable 1。 2.2

8、金水寶膠囊對(duì)CB大鼠血清和肺組織中NO含量的影響結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠血清、肺組織中NO含量均明顯降低(P<0.01)；與模型組比較，金高組、桂龍組血清和肺組織中NO含量均升高(P<0.01)，金低組血清中NO含量也明顯升高(P0.05)；與金低組及桂龍組相比，金高組血清、肺組織中N0含量均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見Table 2。 3 CB大鼠

9、肺組織cNOS的表達(dá)特征及金水寶膠囊的作用機(jī)制正常組大鼠細(xì)支氣管粘膜上皮細(xì)胞胞漿cNOS呈較強(qiáng)的陽性表達(dá)(Fig.7、8)；模型組大鼠可見細(xì)支氣管粘膜上皮細(xì)胞胞漿存在較弱的cNOS陽性反應(yīng)信號(hào)，動(dòng)脈管壁平滑肌細(xì)胞胞漿呈較強(qiáng)陽性表達(dá)(Fig.9、lO)。陽性信號(hào)均呈棕黃色。 金低組與桂龍組細(xì)支氣管粘膜上皮細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)較弱的陽性反應(yīng)(Fig.11、12，15、16)；金高組cNOS表達(dá)呈現(xiàn)較強(qiáng)的陽性信號(hào)。與正常組相似，陽性反應(yīng)主要

10、見于細(xì)支氣管粘膜上皮細(xì)胞胞漿(Fig.13、14)。 結(jié)論： 1 CB狀態(tài)下，血液和肺組織中ET-1的明顯增多和NO合成的不足，共同導(dǎo)致了氣道的炎癥反應(yīng)和組織損傷。這種變化，對(duì)CB的形成和發(fā)展具有重要影響。 2 CB狀態(tài)下，cNOS在細(xì)支氣管粘膜上皮細(xì)胞的表達(dá)受到抑制，并使內(nèi)源性NO生成和釋放減少，從而促進(jìn)支氣管收縮。 3 金水寶膠囊可通過有效抑制ET-1的產(chǎn)生，顯著提高NO含量，恢復(fù)肺血管、支氣管平