腺苷A-,2A-受體對(duì)大鼠小體積肝移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、全文分為四部分： 第一部分 大鼠小體積肝移植模型的建立及其缺血再灌注損傷的初步研究 目的：建立穩(wěn)定實(shí)用的大鼠小體積肝移植模型，并通過(guò)檢測(cè)一些缺血再灌注損傷的指標(biāo)，觀察大鼠小體積肝移植術(shù)后缺血再灌注損傷的程度。 方法：健康雄性SD大鼠，體重為250g～330g，隨機(jī)化分為供體組和受體組，取供體大鼠肝臟右中葉和右上、下側(cè)葉為移植物，占受體大鼠肝重的36％～46％。門靜脈、肝下下腔靜脈采用改良的二袖套法吻合。觀察受體大

2、鼠移植術(shù)后24小時(shí)和7天生存率，死亡后解剖，分析死亡原因。以術(shù)前正常大鼠作為對(duì)照組，使用AsT測(cè)定試劑盒檢測(cè)受體大鼠術(shù)后24小時(shí)內(nèi)血清AsT的變化；酶促反應(yīng)法測(cè)定移植術(shù)后6小時(shí)肝組織丙二醛(MDA)含量；觀察移植術(shù)后6小時(shí)小體積供肝光鏡和電鏡下組織學(xué)變化；TUNEL法檢測(cè)小體積供肝移植術(shù)后6小時(shí)肝細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)論:建立了穩(wěn)定的大鼠小體積肝移植模型，可用于小體積肝移植的實(shí)驗(yàn)研究；大鼠小體積供肝移植術(shù)后表現(xiàn)出嚴(yán)重的缺血再灌注損傷

3、。 第二部分 A<,2A>R對(duì)大鼠小體積肝移植缺血再灌注后氧化應(yīng)激反應(yīng)的作用研究 目的:通過(guò)選擇性激活腺苷A<,2A>受體(A<,2A>R)，觀察大鼠小體積肝移植術(shù)后氧化應(yīng)激反應(yīng)的變化，探討A<,2A>R激活對(duì)減輕大鼠小體積肝移植缺血再灌注后氧化應(yīng)激反應(yīng)的作用及機(jī)制。 方法：供肝獲取后置于4℃冰冷生理鹽水中修整保存80分鐘，然后移植給同種受體大鼠。受體大鼠右側(cè)頸外靜脈置管，CGS組(n=15)于門靜脈血流再開放的

4、同時(shí)使用微量泵以0.5μg/kgmin速度持續(xù)靜脈輸入選擇性A<,2A>R激動(dòng)劑CGS21680 3小時(shí)；CGS+ZM組(n=15)使用CGS21680的同時(shí)，微量泵以0.5μg/kg/min速度持續(xù)輸入A<,2A>R的特異性抑制劑ZM241385 3小時(shí)；對(duì)照組(n=15)處理同實(shí)驗(yàn)組，但在移植肝門靜脈血流再開放時(shí)僅給予與實(shí)驗(yàn)組相同劑量和速度的生理鹽水(25 μl/kg/min)。各組隨機(jī)抽取9只用于生存率研究；余6只移植后6小時(shí)分別

5、取材進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)，比較抗氧化劑(GSH，TOC，AA)的含量、抗氧化酶(SOD，CAT，GSH-Px)的活性以及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量。 結(jié)論：大鼠小體積肝移植缺血再灌注后產(chǎn)生大量氧自由基導(dǎo)致肝臟氧化損傷。A<,2A>R的激活可提高抗氧化酶活性，促進(jìn)抗氧化物質(zhì)的產(chǎn)生，增強(qiáng)機(jī)體抵御氧化應(yīng)激的能力，緩解脂質(zhì)過(guò)氧化狀態(tài)，從而減輕小體積肝移植缺血再灌注后氧化應(yīng)激反應(yīng)，提高了小體積肝移植術(shù)后受體大鼠的生存率。 第三部

6、分 A<,2A>R對(duì)大鼠小體積肝移植缺血再灌注后炎性反應(yīng)的作用研究 目的:通過(guò)選擇性激活A(yù)<,2A>R，觀察大鼠小體積肝移植術(shù)后炎性反應(yīng)的變化，探討A<,2A>R激活對(duì)減輕大鼠小體積肝移植缺血再灌注后炎性反應(yīng)的作用及機(jī)制。 方法:實(shí)驗(yàn)分組、動(dòng)物模型的建立及給藥方法同第二部分。于門靜脈血流開放的同時(shí)分別予CGS21680(0.5μg/kg/min，CGS組)(n=6)、CGS21680(0.5μg/kg/min)+ZM24

7、1385(0.5μg/kg/min)(CGS+ZM組)(n=6)或生理鹽水(25μl/kg/min，對(duì)照組)(n=6)持續(xù)輸入3小時(shí)。 各組移植后6小時(shí)分別取材，采用RT-PCR及ELISA方法比較炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和抗炎因子IL-10的基因及蛋白表達(dá)水平；通過(guò)檢測(cè)髓性過(guò)氧化物酶(MPO)活性以反映中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況；同時(shí)對(duì)肝臟組織進(jìn)行HE染色及電鏡觀察。 結(jié)論:大鼠小體積肝移植缺血再灌注后釋放大量

8、炎性因子，產(chǎn)生強(qiáng)烈的炎性反應(yīng)。A<,2A>R的激活可降低小體積肝移植后大鼠肝臟內(nèi)炎性因子TNF-α、IL-1β以及IL-6的蛋白和基因水平的表達(dá)，從而減輕其炎性反應(yīng)，在小體積肝移植缺血再灌注損傷中起保護(hù)作用。 第四部分 A<,2A>R對(duì)大鼠小體積肝移植缺血再灌注后細(xì)胞凋亡的作用研究 目的:通過(guò)選擇性激活A(yù)<,2A>R，觀察大鼠小體積肝移植術(shù)后細(xì)胞凋亡的變化，探討A<,2A>R激活對(duì)減輕大鼠小體積肝移植缺血再灌注后細(xì)胞凋亡

9、的作用及機(jī)制。 方法:實(shí)驗(yàn)分組、動(dòng)物模型的建立及給藥方法同第二、三部分。于門靜脈血流開放的同時(shí)分別予CGS21680(0.5μg/kg/min，CGS組)(n=6)、CGS21680(0.5μg/kg/min)+ZM241385(0.5μg/kg/min)(CGS+ZM組)(n=6)或生理鹽水(25μl/kg/min，對(duì)照組)(n=6)持續(xù)輸入3小時(shí)。 各組移植后6小時(shí)分別取材，Western Blot法檢測(cè)凋亡抑制蛋白