以CLA-1為靶標(biāo)的微生物來(lái)源抗動(dòng)脈粥樣硬化活性化合物的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及分子機(jī)制研究.pdf

1、心血管疾病在發(fā)達(dá)國(guó)家和大多數(shù)發(fā)展中國(guó)家是危害人類健康的主要?dú)⑹?，而?dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是多種嚴(yán)重心血管疾病的病理基礎(chǔ)。目前臨床上廣泛應(yīng)用的他汀類藥物可以降低20％～40％的心血管事件。要進(jìn)一步降低心血管疾病的危害，在降低低密度脂蛋白膽固醇的同時(shí)必須從預(yù)防和逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的新的治療靶點(diǎn)出發(fā)來(lái)尋找具有新型作用機(jī)制的藥物。近十幾年的來(lái)研究表明，高密度脂蛋白(high d

2、ensity lipoprotein，HDL)的抗AS作用主要基于HDL參與的膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(reverse cholesterol transport，RCT)過(guò)程，并確定清道夫受體BI(scavenger receptor class B typeⅠ，SR-BI)為功能性的HDL受體，人的高密度脂蛋白受體亦被稱作CLA-1。SR-BI/CLA-1在RCT過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，被認(rèn)為是發(fā)現(xiàn)新型心血管藥物潛在的新靶標(biāo)。RCT的增強(qiáng)將有利于A

3、S病灶積蓄的膽固醇減少和病變的逆轉(zhuǎn)，因此可以通過(guò)升高SR-BI/CLA-1表達(dá)水平來(lái)加速RCT，促進(jìn)機(jī)體富余膽固醇酯的清除;能升高SR-BI/CLA-1基因表達(dá)的化合物有可能成為有效治療動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病新型藥物的先導(dǎo)物。
　　 為了尋找能夠提高CLA-1表達(dá)水平的活性化合物，本工作選擇一株陽(yáng)性菌株鏈霉菌04-9179（鑒定為Streptomyces hygroscopicus），對(duì)其發(fā)酵液的活性成分進(jìn)行了分離純化，利用大

4、孔樹(shù)脂HP-20柱層析、ODS柱層析和HPLC制各柱層析等色譜方法分離得到的四個(gè)純化合物9179B、9179D、9179E和9179F，利用ESI-MS、FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR和二維NMR等波譜解析方法對(duì)四個(gè)化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，確證9179B為(S，2E，4E)-7-（4-（二甲氨基）苯基)-4，6二甲基-7-氧代庚基-2，4-烯酰胺(FL657C)，9179D為(2E，4E，6S)-7-（4-（二甲氨基）苯基)-

5、4，6-二甲基-7-氧代-N-((2R,3R,5S，6R)-3，4，5-三羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-氧基）庚基-2，4-烯酰胺(Trichostatin D)，9179E為(S，2E，4E)-7-（4-（二甲氨基）苯基）-N，4，6-三甲基-7-氧代庚基-2，4-烯酰胺(TrichostatinRK)，9179F為4，7-二羥基異黃酮（大豆苷元）。9179B、9179D和9179E均能在篩選模型中以微摩爾濃度上調(diào)CLA-

6、1基因的轉(zhuǎn)錄活性，其活性活性作用在HepG2細(xì)胞利用RT-PCR和Western Blotting在CLA-1轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上得到了證實(shí)。此外，通過(guò)對(duì)PPARγ的轉(zhuǎn)錄激活活性和對(duì)CLA-1基因上游啟動(dòng)子區(qū)不同反應(yīng)元件的影響的研究，初步確定了三個(gè)活性化合物的可能作用位點(diǎn)。9179B、9179D和9179E能夠增加RAW264.7細(xì)胞對(duì)DiI-HDL的攝取。另外，9179B也能在微摩爾濃度下上調(diào)ABCA1基因的轉(zhuǎn)錄活性及上調(diào)HepG2細(xì)胞中