白粉寄生孢的發(fā)生、致病力研究及ISSR分子指紋分析.pdf

1、本文以白粉茵的重寄生菌-白粉寄生孢(Ampelomyces quisqualis Ces．exSchlecht．，AQ)為研究對(duì)象，從生態(tài)多樣性、培養(yǎng)性狀、致病力分化及ISSR分子指紋分析等幾個(gè)方面對(duì)來(lái)自國(guó)內(nèi)部分地區(qū)不同來(lái)源的白粉寄生孢進(jìn)行了系統(tǒng)研究，研究結(jié)果如下： 1.國(guó)內(nèi)11省白粉寄生孢的自然發(fā)生情況。在450余份標(biāo)樣中，共發(fā)現(xiàn)23科43屬47種感染白粉菌的植物標(biāo)本中有白粉寄生孢標(biāo)本89份，這些白粉寄生孢寄生于10屬33種白

2、粉菌上，發(fā)生率為4.17～50％，重寄生強(qiáng)度為0.4～42％，主要發(fā)生于葫蘆科(Cucurbitaceae)、菊科(Compositae)、薔薇科(Rosaceae)、豆科(Leguminosae)等寄主植物及白粉茵屬(Erysiphe)、單囊殼屬(Sphaerotheca)等寄主白粉菌上。研究發(fā)現(xiàn)白粉寄生孢的中國(guó)新記錄寄主植物有：龍芽草(Agrimoniapilosa)、木防己(Cocculus orbiculatus)、繡球花(Hy

3、drangea macrophylla)、胡桃(Juglans regia)、南牡蒿(Artemisia eriopoda)、南蛇藤(Celastrus orbiculatus)、梅(Armeniaca mume)、委陵菜(Potentilla chinensis)、澤蘭(Erigeron divaricatus)、甘藍(lán)(Brassica oleracea)、白芷(Angelica dahurica)、紫茉莉(Mivabilis jal

4、apa)、黑綠豆(Phaseoolus mungo)、牛膝(Achyranthes bidentata)及懸鈴木(Platanus acerifolia)等15種。中國(guó)新記錄寄主白粉菌有：羽翼草單囊殼(Sphaerotheca aphanis)、防己叉絲殼(Microsphaera pseudolonicerae)、繡球鉤絲殼(Uncinula hydrangeae)、山田叉絲殼(Microsphaera yamadai)、衛(wèi)矛鉤絲殼(

5、Uncinula sengokui)、三指叉絲單囊殼(Podosphaera tridactyla)、十字花科白粉菌(Erysiphe cruciferarum)等7種。研究表明白粉寄生孢在我國(guó)有較寬的寄主范圍和豐富的生態(tài)多樣性。 2.描述了不同來(lái)源白粉寄生孢的培養(yǎng)性狀。結(jié)果表明白粉寄生孢在培養(yǎng)性狀的表型上存在較豐富的多態(tài)性，表現(xiàn)在菌落生長(zhǎng)速度、質(zhì)地、顏色變化、產(chǎn)孢量及菌球的大小、顏色、數(shù)量等方面，其多態(tài)性與地理來(lái)源表現(xiàn)了一定的

6、相關(guān)性。 3.對(duì)27株白粉寄生孢進(jìn)行了致病力研究。運(yùn)用科學(xué)統(tǒng)計(jì)法初次明確了白粉寄生孢之間、寄主植物/白粉菌之間影響白粉寄生孢對(duì)白粉菌致病力大小的主次效應(yīng)，證明了當(dāng)植物品種不同而白粉菌為同種時(shí)，植物品種間的顯著差異和白粉寄生孢與植物品種互作間的顯著差異是造成白粉寄生孢致病力差異的主要效應(yīng)；當(dāng)寄主植物和白粉菌均不同時(shí)，白粉寄生孢對(duì)白粉菌的致病力差異來(lái)自三者各自之間的顯著差異和它們互作間的顯著差異。篩選出防治蘋果、草莓、大花金雞菊白粉

7、菌的生防潛力菌株：編號(hào)為5144、5120、6097、6071。研究表明白粉寄生孢對(duì)寄主植物/白粉菌沒(méi)有嚴(yán)格的選擇性，但有致病力強(qiáng)弱的劃分。 有利于白粉寄生孢發(fā)揮生防潛力的條件為：溫度20～25℃；相對(duì)濕度100％，最好有水滴，保濕時(shí)間至少3d；PSA平板上25℃培養(yǎng)不超過(guò)90d；保證有一定的接種量；混和菌株接種；發(fā)病初期接種；避免強(qiáng)光直射。 4.初次運(yùn)用ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat

8、)分子標(biāo)記對(duì)來(lái)自我國(guó)部分省市和英國(guó)、匈牙利共60株白粉寄生孢進(jìn)行了分子指紋分析。 結(jié)果如下： Ⅰ建立了適于ISSR-PCR的白粉寄生孢基因組DNA的尿素快速提取法，建立了穩(wěn)定的ISSR-PCR分析的反應(yīng)體系和程序。 Ⅱ試驗(yàn)證明白粉寄生孢中微衛(wèi)星SSR是普遍存在的，白粉寄生孢種群內(nèi)存在著較高的遺傳變異多態(tài)性，從18個(gè)引物中篩選出5個(gè)具有較高多態(tài)性的ISSR引物，共擴(kuò)增出45條標(biāo)記帶，其中43條為多態(tài)性標(biāo)記帶，證實(shí)了

9、有的ISSR引物在某些真菌遺傳多態(tài)性分析中具有較高的通用性。ISSR分析法所構(gòu)建的樹(shù)狀圖在遺傳相似系數(shù)為0.68時(shí)將白粉寄生孢分為7個(gè)群(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ)，遺傳相似系數(shù)為0.62時(shí)分為5個(gè)群(A、B、C、D、E)。白粉寄生孢的ISSR多態(tài)性與致病力分化、培養(yǎng)性狀的表型分化均表現(xiàn)了一定的相關(guān)性，而與其地理來(lái)源密切相關(guān)。 Ⅲ ISSR分子標(biāo)記與rDNA-ITS序列分析在白粉寄生孢的遺傳聚類圖上非常相似，并且ISSR分子標(biāo)