硫化氫對(duì)肝硬化大鼠肝臟survivin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用硫化氫（hydrogensulfideH2S）供體硫氫化鈉（NaSH）及硫化氫抑制劑炔丙基甘氨酸（PPG）干擾肝硬化大鼠，觀察在硫化氫增多、不變、減少的肝硬化大鼠肝臟內(nèi)抗凋亡因子存活素(Survivin)的變化，進(jìn)一步探討在肝硬化大鼠肝臟中存活素與硫化氫表達(dá)關(guān)系，了解H2S在肝硬化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能的作用機(jī)制，為肝硬化的發(fā)生、發(fā)展及臨床治療方向提供理論實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　雌性SD大鼠經(jīng)四氯化

2、碳(carbontetrachloride，CCl4)復(fù)合因素法復(fù)制肝硬化的大鼠模型：皮下注射40％四氯化碳與棉籽油混合溶液，首次注射量為0.05ml/公斤體重，以后每隔4天腹腔注射一次，每次0.03ml/公斤體重，共注射12次，其飲用液體為濃度15%的乙醇溶液；前2周用高脂飼料，以后一直用高膽固醇飼料。第52天后大鼠肝硬化造模結(jié)束。造模結(jié)束后隨機(jī)分為：硫氫化鈉干擾組，（S組，n=8）、炔丙基甘氨酸干擾組（P組n=8）、肝硬化對(duì)照組（C

3、組n=8），S組每天腹腔注射硫氫化鈉56mg/(kg·d)，P組每天腹腔注射炔丙基甘氨酸30mg/(kg·d)，肝硬化對(duì)照組每天腹腔注射等量生理鹽水，共7天，各組大鼠喂養(yǎng)方式相同。用蘇木素-伊紅染色觀察大鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)變化，用敏感硫電極法檢測(cè)肝硬化大鼠門靜脈血漿中H2S的量，應(yīng)用免疫組化檢測(cè)大鼠肝臟中survivin蛋白表達(dá)量，應(yīng)用realtime-PCR檢測(cè)大鼠肝臟SurvivinmRNA的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)

4、軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.05示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　（1）肝硬化大鼠造模的建立：肉眼觀其肝臟體積縮小變形，色澤變淡，表面彌漫大小不等結(jié)節(jié)和塌陷區(qū)，邊緣呈鈍狀；肝硬化大鼠肝臟組織通過(guò)病理學(xué)觀察，見(jiàn)到肝組織明顯破壞，纖維結(jié)締組織增生，假小葉形成，肝硬化大鼠造模成功。（2）門靜脈血漿中H2S濃度：硫氫化鈉組較肝硬化對(duì)照組門靜脈血漿內(nèi)H2S明顯升高（P<0.05），炔丙基甘氨酸組較肝硬化

5、對(duì)照組門靜脈血漿內(nèi)H2S濃度明顯下降（P<0.05）。（3）大鼠肝組織中survivinmRNA表達(dá)：S組較C組大鼠肝組織中surivinmRNA增加（P<0.05），P組較C組大鼠肝組織中survivinmRNA表達(dá)無(wú)明顯差異（P>0.05）。（4）大鼠肝組織中survivin蛋白表達(dá)：S組與C組比較，其肝組織中survivin蛋白增加（P<0.05），P組與C組較，其肝組織中survivinmRNA表達(dá)無(wú)明顯差異（P>0.05）。<