脊髓損傷后一氧化氮合酶的表達特征及其反義核酸的應用研究.pdf

1、目的:通過研究不同類型的NOS在損傷后動物脊髓組織中的分布、表達和信號轉導通路的改變情況,評價不同類型NOS在脊髓繼發(fā)性損傷反應中的作用;應用與NOS對應的反義寡脫氧核苷酸(ASODN)改變脊髓損傷后NOS基因的表達,觀察對脊髓損傷后神經功能恢復的影響,對脊髓損傷的發(fā)生機理和治療途徑做初步的探討.方法:1、制備大鼠脊髓壓迫傷模型,分別于大鼠脊髓壓迫傷后6、12、24、48、72h等5個時間點,用免疫組織化學和圖像分析的方法判斷脊髓損傷后

2、不同類型NOS在大鼠脊髓組織中的分布和表達情況,確定何種與脊髓損傷后的繼發(fā)性損傷有關,并用透射電鏡觀察細胞凋亡的形態(tài)改變;2、p38MAPK信號轉導途徑在損傷后的改變情況通過信號轉導特異性抑制劑SB203580并結合Western blotting方法進行檢測;3、根據前兩部分的結論,應用與脊髓損傷相關的NOS脂質體介導的反義寡脫氧核苷酸進行動物體內治療,通過RT-PCR技術檢測NOS-mRNA的改變,用分光光度法測定組織中NO含量和N

3、OS活性,觀察脊髓損傷后神經功能的恢復情況:包括動物行為學、神經電生理、MRI和病理組織學等指標,傷段脊髓組織細胞凋亡的改變程度通過流式細胞技術進行研究,最后推測NOS在脊髓損傷中的表達特征、作用機理和可能的治療途徑.結論:脊髓損傷后脊髓組織中主要表達iNOS和nNOS,并存在p38MAPK信號轉導通路改變和細胞凋亡,脊髓損傷后應用NOS反義核酸可以使脊髓損傷后神經功能得到改善,iNOS活性變化對脊髓損傷的恢復更具決定作用,其作用與對細