人參多糖的系統(tǒng)分析及其免疫活性研究.pdf

1、人參（Panax ginseng C．A． Meyer）作為名貴的中藥在我國(guó)已有2000多年的歷史。人參含有多種有效成分，如人參皂甙、人參多肽和人參多糖等。已有文獻(xiàn)報(bào)道人參多糖具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗粘附、抗氧化、降血糖等活性，但目前還缺乏對(duì)人參多糖組成和結(jié)構(gòu)的全面了解。為了進(jìn)一步全面了解人參多糖的組成和結(jié)構(gòu)以及結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系，本文通過水提醇沉得到人參水溶性總多糖，再應(yīng)用離子交換和凝膠柱層析相組合的方法將人參總多糖全面系統(tǒng)地分級(jí)，并獲

2、得一系列均一的人參多糖級(jí)分。進(jìn)而采用酶法、化學(xué)法和現(xiàn)代儀器分析方法分析了各種多糖的結(jié)構(gòu)特征。同時(shí)，在小鼠體內(nèi)研究人參多糖的抗腫瘤及免疫活性，研究結(jié)果如下： 通過100℃熱水煮提、80％乙醇沉淀、Sevag法脫蛋白得到人參水溶性多糖WGP（9．7％）。WGP總糖含量為93．8％，糖醛酸含量為7．6％，淀粉含量為75．1％，蛋白含量為0．9％。HPLC分析其單糖組成為葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、鼠李糖和半乳糖醛酸，摩爾比為77

3、．9：6．8：4．6：1．0：1．1：8．7。 將WGP用DEAE—纖維素離子交換柱層析進(jìn)行分級(jí)，先用H2O和0．5 M氯化鈉水溶液分步洗脫，得到中性級(jí)分WGPN和酸性級(jí)分WGPA；將WGPA再次用DEAE—纖維素離子交換柱層析分級(jí)，以0、0．1、0．2、0．3和0．5 M的NaCl水溶液分步洗脫，得到相應(yīng)的五個(gè)級(jí)分WGPA—H、WGPA-1、WGPA-2、WGPA-3和WGPA-4。根據(jù)分子量分布情況，用凝膠柱層析將WGPA-

4、1～WGPA-4進(jìn)一步純化分級(jí)得到WGPA-1—AG、WGPA-1—HG、WGPA-2-AG、WGPA-2-HG、WGPA-3—HG和WGPA-4-HG。 通過酶學(xué)方法、凝膠滲透色譜、高效液相色譜、傅立葉紅外光譜、13C—核磁共振分析測(cè)定人參多糖各級(jí)分的結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果表明WGPN是分子量不均一的能夠被淀粉酶完全水解的淀粉樣葡聚糖，而WGPA—H則是由可被淀粉酶水解的淀粉樣葡聚糖與不能被淀粉酶水解的阿拉伯半乳聚糖組成的混合物。這兩

5、種級(jí)分的分子量分布較寬，呈不均一狀態(tài)；WGPA-1—AG和WGPA-2-AG的分子量均一，重均分子量分別為1．1×105和1．2×105。這兩個(gè)級(jí)分主要是由阿拉伯糖和半乳糖組成，同時(shí)含有少量的葡萄糖、鼠李糖和半乳糖醛酸。其中的阿拉伯糖以α-1→、1→5、1→3，5糖苷鍵連接，而半乳糖以β-1→、1→3、1→4、1→3，6等糖苷鍵連接，均屬于典型的阿拉伯半乳聚糖，并帶有少量的Ⅰ型聚鼠李半乳糖醛酸結(jié)構(gòu)域（RG—I）和聚半乳糖醛酸結(jié)構(gòu)域（HG

6、）；WGPA-1—HG～WGPA-4-HG是均一級(jí)分，重均分子量依次為3．5×103、8．1×103、1．9×104和6．7×104，這四個(gè)級(jí)份主要由半乳糖醛酸構(gòu)成，半乳糖醛酸含量依次為62．4％、83．6％、90．9％和92．1％。α-1→4—GalpA連接的線性聚半乳糖醛酸結(jié)構(gòu)域構(gòu)成它們的主鏈，部分半乳糖醛酸C-6羧基被甲酯化（甲酯化度30％～0），少量的中性糖側(cè)鏈通過RG—I結(jié)構(gòu)域與HG主鏈相連。 綜合本論文的研究結(jié)果與文

7、獻(xiàn)的報(bào)道，人參多糖由淀粉樣葡聚糖和人參果膠組成，人參果膠又包含阿拉伯半乳聚糖和聚半乳糖醛酸兩種類型。 應(yīng)用高碘酸氧化、Smith降解、甲基化和部分酸水解等方法分析WGPA-2-AG的精細(xì)結(jié)構(gòu)。發(fā)現(xiàn)WGPA-2-AG的主鏈以α-1→4—GalpA構(gòu)成的聚半乳糖醛酸結(jié)構(gòu)域和以→4）—α—GalpA—（1→2）—α—Rhap—（1→構(gòu)成的Ⅰ型聚鼠李半乳糖醛酸結(jié)構(gòu)域組成，側(cè)鏈含有阿拉伯聚糖、半乳聚糖和阿拉伯半乳聚糖結(jié)構(gòu)域，末端為Araf

8、和少量的Galp與Rhap，即WGPA-2-AG由聚半乳糖醛酸結(jié)構(gòu)域形成的“平滑區(qū)”和Ⅰ型聚鼠李半乳糖醛酸結(jié)構(gòu)域連接較多側(cè)鏈形成的“毛發(fā)區(qū)”共同構(gòu)成。WGPA-2-AG的側(cè)鏈中含有1—、1，5-、1，3，5-Araf和1—、1，3—、1，6—、1，3，6—Galp。42．9％的Ara位于非還原末端，主要連接于1，5-Araf的O-3或O-5以及1，3—Galp的O-6；58．1％的Araf以1→5連接方式構(gòu)成阿拉伯聚糖結(jié)構(gòu)域的主鏈，其中