養(yǎng)殖蝦環(huán)丙沙星耐藥菌及相關(guān)基因研究.pdf

1、抗生素廣泛地在臨床治療和畜牧業(yè)中使用，抗生素的濫用導(dǎo)致其在環(huán)境中的含量不斷升高。環(huán)境中敏感細(xì)菌被迅速殺死淘汰，只有對(duì)抗生素耐藥的細(xì)菌才能夠在復(fù)雜環(huán)境中生存。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，抗生素的吸收率是20％-30％，也就是說(shuō)，剩余的抗生素大部分被排出，擴(kuò)散到四周環(huán)境中?？剐约?xì)菌攜帶的抗性基因(Antibiotics Resistance Genes，ARGs)可以通過(guò)側(cè)向基因轉(zhuǎn)移在種屬差異的細(xì)菌間傳播，導(dǎo)致敏感菌可能因獲得外源抗性基因產(chǎn)生抗性。

2、>　　本實(shí)驗(yàn)采用生活中經(jīng)常食用的南美白對(duì)蝦為研究對(duì)象，使用的喹諾酮類的代表抗生素環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin，CIP)作為篩選抗生素，從蝦體中分離的83株菌中篩選到3株抗性菌，所占比例為3.6％，編號(hào)為CIP1、CIP2和CIP29。綜合細(xì)胞形態(tài)學(xué)、革蘭氏染色、16S rDNA序列分析和Biolog等技術(shù)對(duì)蝦源環(huán)丙沙星抗性菌進(jìn)行分類和菌種鑒定，與CIP1、CIP2號(hào)菌相似度最高的是肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae），與CI

3、P29號(hào)菌相似度最高的是鮑曼不動(dòng)桿菌（A.baumannii）。三株菌的最低抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration，MIC)均超過(guò)64μg/ml，在不斷傳代中抗性保持穩(wěn)定水平。以NCBI已經(jīng)公布的相似菌的全基因組為參照，其gyrA基因?yàn)槟０?，并以敏感菌株gyrA基因序列作為對(duì)照進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)CIP29號(hào)菌的喹諾酮耐藥決定區(qū)（Quinolone Resistance DeterminingRegions

4、，QRDR）在氨基酸序列第81位發(fā)生錯(cuò)義突變，由絲氨酸變?yōu)榱涟彼?，原核苷?41位至243位的密碼子變化是(TCA-TTA)，此外還發(fā)生兩處同義突變。第81位屬于QRDR區(qū)活性位點(diǎn)，其與喹諾酮類抗生素的接觸作用密切相關(guān)，正是這些位點(diǎn)的突變致使喹諾酮類抗生素?zé)o法和它們作用，不能順利結(jié)合，從而失效。而CIP1、CIP2號(hào)菌的gyrA基因發(fā)生的全部是同義突變，所編碼的氨基酸沒(méi)有產(chǎn)生變化。
　　通過(guò)對(duì)食用蝦中抗性細(xì)菌及抗性基因的研究，對(duì)食