氯乙烯接觸工人染色體損傷的遺傳易感性研究.pdf

1、氯乙烯單體(vinyl chloride monomer，VCM)是一種重要的化工原料，主要用于合成聚氯乙烯。隨著石油工業(yè)的迅速發(fā)展，氯乙烯的產(chǎn)量在全球直線上升。我國目前年產(chǎn)量約占全球產(chǎn)量的1/10，已成為世界聚氯乙烯生產(chǎn)大國。因此，龐大的職業(yè)接觸氯乙烯人群的健康問題值得關(guān)注。 VCM是確定的人類致癌劑，可導(dǎo)致多系統(tǒng)、多器官腫瘤的發(fā)生。對(duì)其致癌機(jī)制的研究認(rèn)為主要是VCM活性代謝產(chǎn)物導(dǎo)致遺傳物質(zhì)損傷而啟動(dòng)致癌過程。目前，發(fā)達(dá)國家V

2、CM職業(yè)接觸限值多為 1ppm(2.79mg/m<'3>，PEL)，而我國VCM時(shí)間加權(quán)平均容許濃度(PC-TWA)為10mg/m<'3>，短時(shí)間接觸容許濃度為(PC-STEL)2Smg/m<'3>，高于西方國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)數(shù)倍。在我國現(xiàn)行衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)接觸濃度情況下，能否對(duì)接觸工人的遺傳物質(zhì)產(chǎn)生損害作用還需進(jìn)一步探討。而且在同樣接觸條件下，并不是所有個(gè)體都會(huì)發(fā)生腫瘤，提示接觸VCM個(gè)體腫瘤的遺傳易感性不同。腫瘤遺傳易感性差異的影響因素主要與代謝

3、酶表達(dá)差異、DNA修復(fù)能力不同以及細(xì)胞周期調(diào)控蛋白活性不同有關(guān)。目前有關(guān)VCM代謝酶基因多態(tài)與毒性的關(guān)系已經(jīng)研究得比較清楚，但DNA損傷修復(fù)基因多態(tài)與毒性關(guān)系的研究報(bào)道尚少，而細(xì)胞周期調(diào)控基因多態(tài)與毒性關(guān)系的研究還未見報(bào)道。 本文通過接觸VCM工人累積接觸劑量的較準(zhǔn)確計(jì)算，來評(píng)估累積接觸劑量和VCM作業(yè)工人肝損傷及染色體損傷之間的關(guān)系，探討接觸較低濃度VCM時(shí)的主要效應(yīng)標(biāo)志物；通過人群研究探討DNA損傷修復(fù)基因和細(xì)胞周期調(diào)控基因

4、多態(tài)與VCM致遺傳物質(zhì)損傷之間的關(guān)系，為尋找易感性標(biāo)志物，早期發(fā)現(xiàn)易感人群，提供基礎(chǔ)研究資料。 本次研究對(duì)VCM接觸工人的肝功能(血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，ALT)和肝B超以及利用胞質(zhì)分裂阻滯微核試驗(yàn)方法(簡稱CB微核試驗(yàn))對(duì)染色體損傷情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示VCM接觸組和對(duì)照組肝功能和肝B超檢測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但VCM接觸組外周血淋巴細(xì)胞微核細(xì)胞率(簡稱微核率)顯著高于對(duì)照組，提示外周血淋巴細(xì)胞微核率可以作為評(píng)價(jià)低濃度VCM暴

5、露的效應(yīng)指標(biāo)。 繼而以外周血淋巴細(xì)胞微核率作為染色體損傷的效應(yīng)指標(biāo)，應(yīng)用PCR-RFLP和CRS-RFLP法對(duì)VCM接觸工人的DNA損傷修復(fù)基因和細(xì)胞周期調(diào)控基因的多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)用Poisson回歸分析和PHASE 2.0.2軟件分析各基因多態(tài)位點(diǎn)及其單倍型與染色體損傷之間的關(guān)系。 選擇參與BER和NER過程的7個(gè)DNA損傷修復(fù)基因：APE1、XPC、XPG、XPA、ERCC1、XPF、XPD，對(duì)其 10 多態(tài)位點(diǎn)

6、進(jìn)行檢測(cè)和分析。結(jié)果在調(diào)整年齡、性別、累計(jì)接觸劑量以及吸煙、飲酒等因素后，XPC PAT+/-和+/+與野生型-/-相比，F(xiàn)R=0.8486 (95％CI：0.7322～0.9891)，P(0.05；XPF T2063A 位點(diǎn)突變型TA/AA與野生型TT相比，F(xiàn)R=0.5275(95％CI：0.3303～0.7943)，提示上述兩個(gè)位點(diǎn)突變是VCM致染色體損傷的保護(hù)因素。而XPA A23G位點(diǎn)突變型AG/GG與野生型AA相比，F(xiàn)R=1.

7、2435(95％CI：1.0472～1.4835)，P<0.05；XPD Lys751Gln 這一多態(tài)位點(diǎn)突變型 XPDc.751 Lys/Gln+Gln/Gln 與野生型 XPDc.751 Lys/Lys 相比，F(xiàn)R=1.1976，(95％CI：0.9834～1.4474)，P<0.05，提示XPA A23G和XPDLys751Gln這兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)突變是 VCM 致染色體損傷的危險(xiǎn)因素。其余基因未發(fā)現(xiàn)與 VCM致染色體損傷有關(guān)。對(duì) X

8、PC(c.499-PAT-c.939)的單倍型分析結(jié)果顯示，Hap (AAA/BAA)微核率顯著高于Hap(AAA/AAA)(A代表野生型等位基因，B代表突變型等位基因)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明攜帶該種單倍型對(duì)的個(gè)體為VCM致染色體損傷的易感人群。XPD(c.312-c.751)的單倍型分析結(jié)果顯示，攜帶Hap(BA/BB)的個(gè)體微核率顯著高于野生型Hap(AA/AA)，表明兩個(gè)位點(diǎn)突變?cè)黾恿薞CM致染色體損傷的易感性。 對(duì)細(xì)胞

9、周期調(diào)控基因多態(tài)性的研究，選擇P53、P21和CCND1等3個(gè)基因的6 個(gè)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)和分析。結(jié)果在調(diào)整年齡、性別、累計(jì)接觸劑量以及吸煙、飲酒等因素后，只有P53Intron6多態(tài)與VCM致染色體損傷有關(guān)，F(xiàn)R=1.23(95％CI：0.97～1.55)，P<0.05。未發(fā)現(xiàn)其他基因與VCM致染色體損傷有關(guān)。對(duì)P53(c.72-intron3-intron6) 的單倍型分析結(jié)果顯示，Hap(BBB/AAA)和Hap(BAB/AAA)

10、微核率顯著高于Hap(AAA/A從)，調(diào)整后的FR和95％C1分別為1.48(1.05-2.06)和1.82(1.06-2.92)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PER測(cè)定VCM暴露工人P53、P21和CCND1mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果顯示隨累積接觸劑量的增加，P53和P21的表達(dá)均有一定程度的增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P53 和 p21 mRNA 表達(dá)顯著相關(guān)，證實(shí) VCM 致染色體損傷是通過P53-P21-CDK-Cyclin經(jīng)