三氯乙烯藥疹樣皮炎發(fā)病機(jī)制及其易感性研究.pdf

1、本文由5個(gè)部分組成：第一部分發(fā)現(xiàn)病例場(chǎng)所所用三氯乙烯成份分析；第二部分三氯乙烯藥疹樣皮炎患者部分免疫功能變化觀察；第三部分三氯乙烯染毒小鼠免疫功能變化研究；第四部分三氯乙烯藥疹樣皮炎與免疫相關(guān)基因易感性關(guān)系的研究；第五部分三氯乙烯藥疹樣皮炎患者基因表達(dá)變化的初步研究。 第一部分發(fā)現(xiàn)病例場(chǎng)所所用三氯乙烯成份分析 目的：選取部分發(fā)生三氯乙烯藥疹樣皮炎患者工作場(chǎng)所中正在使用的三氯乙烯進(jìn)行全成份氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)機(jī)檢測(cè)，檢測(cè)其中各

2、種雜質(zhì)的含量，了解各工廠導(dǎo)致三氯乙烯藥疹樣皮炎的三氯乙烯中是否存在共同雜質(zhì)，為確定三氯乙烯在該病發(fā)病機(jī)制中作用提供依據(jù)。 方法：選取9個(gè)發(fā)生三氯乙烯藥疹樣皮炎工廠病人發(fā)病時(shí)正在使用的三氯乙烯，采用HP6890/5973氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，抽取0.4ml三氯乙烯直接進(jìn)樣。在經(jīng)氣相色譜分離后，對(duì)離子流中每一峰的質(zhì)譜圖與譜庫(kù)中譜圖比對(duì)，與某物質(zhì)譜圖匹配率達(dá)90％以上時(shí)確定為該物質(zhì)。進(jìn)行全成份分析。然后將所有樣品進(jìn)行匯總，觀察是否存在

3、共同雜質(zhì)。如存共同雜質(zhì)則判斷其是否存存致敏可能。 結(jié)果：9個(gè)工作場(chǎng)所三氯乙烯中雜質(zhì)不盡相同，其中9個(gè)樣品中共同的成份為三氯乙烯、1-1-2-三氯乙烷和四氯乙烯。另外，三氯甲烷、二甲苯和四氯化碳分別在約2/3樣品中檢出。 結(jié)論：綜合本次研究結(jié)果，所有樣品中除三氯乙烯外存在共同雜質(zhì)：1-1-2-三氯乙烷和四氯乙烯，但尚未見二者引起致敏的報(bào)道。初步認(rèn)為三氯乙烯藥疹樣皮炎的過敏原可能是三氯乙烯。 第二部分三氯乙烯致藥疹樣

4、皮炎患者部分免疫功能變化 目的：通過對(duì)三氯乙烯致藥疹樣皮炎患者部分免疫功能指標(biāo)的觀察，了解三氯乙烯藥疹樣皮炎患者發(fā)病時(shí)機(jī)體部分變化情況，為探索發(fā)病機(jī)制提供線索。 方法：采集病人外周靜脈血進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。采用MTT法觀察患者淋巴細(xì)胞在加入三氯乙烯前后增殖情況差異；觀察患者白細(xì)胞在體外加入三氯乙烯后其移動(dòng)范圍的變化以及將三氯乙烯藥疹樣皮炎患者CD4+/CD8+比值與正常對(duì)照進(jìn)行比較。 結(jié)果：三氯乙烯(40mg/L及80

5、mg/L)可顯著促進(jìn)三氯乙烯致藥疹樣皮炎患者淋巴細(xì)胞增殖(P＜0.05)；該類患者CD4+/CD8+與正常對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性意義；三氯乙烯對(duì)該類患者白細(xì)胞移動(dòng)的抑制指數(shù)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。 結(jié)論：提示TCE可能是該類患者免疫反應(yīng)的抗原(或半抗原)。 第三部分三氯乙烯染毒小鼠免疫功能變化研究 目的：本部分研究應(yīng)用NIH小鼠染毒后，進(jìn)行小鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn)和脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)等，觀察了三氯乙烯染毒小鼠免疫功能的

6、變化，為探索三氯乙烯致敏作用提供依據(jù)。 方法：給予NIH小鼠皮下染毒三氯乙烯后，研究胸腺、脾、肝臟等臟器系數(shù)變化情況、進(jìn)行足跖腫脹實(shí)驗(yàn)、脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)等。 結(jié)果：三氯乙烯染毒小鼠胸腺、脾臟器系數(shù)等未見明顯變化。24h、48h時(shí)小鼠足跖腫脹系數(shù)明顯高于對(duì)照組。80mg/L三氯乙烯可抑制對(duì)照組脾淋巴細(xì)胞的增殖，但可促進(jìn)染毒小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖。 結(jié)論：三氯乙烯可能誘導(dǎo)NIH小鼠產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)。 第四部分

7、三氯乙烯藥疹樣皮炎與免疫相關(guān)基因易感性關(guān)系的研究 目的：根據(jù)HLA-DM、HLA-DQA和Lag-3基因多態(tài)性在三氯乙烯藥疹樣皮炎和正常對(duì)照分布情況，探索三氯乙烯藥疹樣皮炎的易感性基因，為其危害防治提供依據(jù)。 方法：提取病例組及對(duì)照組淋巴細(xì)胞DNA，應(yīng)用降落式PCR擴(kuò)增，分別采用限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性檢測(cè)方法、直接測(cè)序或二者結(jié)合方法，確定其HLA-DM、HLA-DQA和Lag-3基因多態(tài)性，比較兩組之間三個(gè)基因的等位基因型

8、和基因型出現(xiàn)頻率。 結(jié)果：病例組HLA-DMA*0101等位基因頻率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，病例組HLA-DMA*0102等位基因頻率明顯低于對(duì)照組。病例組HLA-DMB*0103等位基因頻率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。其他等位基因型頻率在兩組之間均無(wú)顯著性差異。對(duì)照組HLA-DMA*0102-*0102純合子比例明顯高于病例組(P＜0.05)，OR為3.86，CI為2.78-4.94。而對(duì)于HLA-DMB，病例組*

9、0101-*0102雜合子比例明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)，OR為3.59，CI為2.71-4.47。其他HLA-DMA、DMB基因型頻率在兩組之間均無(wú)顯著性差異。 HLA-DQA等位基因型中，*0201頻率在病例組明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。*05頻率在病例組明顯低于對(duì)照組，但P值經(jīng)校正后大于0.05。 所有受檢的病例及對(duì)照Lag-3基因的exonl-6及exon-8序列與Genebank中序列一致，未發(fā)現(xiàn)缺失、

10、突變及多態(tài)性情況。exon-7存在多態(tài)性，但其在兩組間分布情況差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 結(jié)論：HLA-DM基因、HLA-DQA基因多態(tài)性可能與三氯乙烯藥疹樣皮炎的易感性有關(guān)。Lag-3基因多態(tài)性可能與三氯乙烯藥疹樣皮炎的易感性無(wú)關(guān)。 第五部分三氯乙烯藥疹樣皮炎患者基因表達(dá)變化的初步研究 目的：了解三氯乙烯藥疹樣皮炎患者治療前后(治療后近似看作正常)基因表達(dá)譜是否存在差異，涉及哪些基因。進(jìn)而選取病人共同改變的

11、部分基因，應(yīng)用熒光定量PCR方法在其他病人加以驗(yàn)證。通過觀察三氯乙烯藥疹樣皮炎治療前后外周血淋巴細(xì)胞中基因表達(dá)改變，探索三氯乙烯藥疹樣皮炎涉及哪些基因及其病理過程。為研究三氯乙烯藥疹樣皮炎發(fā)病機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。 方法：收集12例病人入院及激素治療一個(gè)月后的外周血淋巴細(xì)胞，分別提取總RNA。其中2例應(yīng)用基因芯片檢測(cè)治療前后基因表達(dá)譜改變。然后比較兩例結(jié)果，找出其共有的改變。在基因芯片篩選出的共有差異表達(dá)基因中選取部分表達(dá)差異較大的

12、10個(gè)基因在其他10個(gè)病人中加以驗(yàn)證。 結(jié)果：將兩個(gè)樣品信號(hào)強(qiáng)度間的比值(Ratio)大于2或小于0.5的數(shù)據(jù)作為有表達(dá)變化的基因數(shù)據(jù)。在病例506中有基因表達(dá)改變317個(gè)，其中與治療后相比，在治療前樣品中表達(dá)上調(diào)的基因有262個(gè)，下調(diào)表達(dá)的基因有55個(gè)；在病例507中這類基因有591個(gè)，其中與治療后相比，在治療前樣品中表達(dá)上調(diào)的基因有467個(gè)，下調(diào)表達(dá)的基因有124個(gè)。兩例同為上調(diào)的基因147個(gè)，同為下調(diào)的基因9個(gè)。從初步的結(jié)