異氟醚對(duì)老齡大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力和海馬UCH-L1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：有關(guān)吸入麻醉藥對(duì)嚙齒動(dòng)物認(rèn)知功能影響的研究報(bào)告結(jié)果并不一致，且其作用機(jī)制并不明確。本研究旨在揭示認(rèn)知功能障礙的發(fā)生和異氟醚使用之間是否相關(guān)，并探討異氟醚是否影響神經(jīng)元特異性泛素C末端水解酶(UCH-L1)的表達(dá)，從而影響泛素依賴的蛋白質(zhì)通過(guò)泛素蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)降解這一可能途徑導(dǎo)致神經(jīng)元功能障礙。
　　 方法：選擇清潔級(jí)健康生長(zhǎng)的22月齡的雄性SD大鼠作為研究對(duì)象，經(jīng)篩選后隨機(jī)分為對(duì)照組(C組，n=10)、異氟醚麻醉后

2、24h組(Ⅰ組，n=10)和異氟醚麻醉后72h組(Ⅱ組，n=10)。異氟醚麻醉組大鼠置于連接在麻醉機(jī)螺紋管回路中的經(jīng)預(yù)充的自制麻醉箱中，設(shè)氧流量為2L/min，以3％異氟醚行麻醉誘導(dǎo)；待翻正反射消失后，用14G靜脈套管行氣管插管并接呼吸回路和氣體采樣管，以2％異氟醚維持麻醉2h。大鼠在麻醉誘導(dǎo)和維持期間均保留規(guī)律自主呼吸，監(jiān)測(cè)其各項(xiàng)生命體征，包括平均動(dòng)脈壓、心率、呼吸頻率、鼠尾動(dòng)脈脈搏血氧飽和度、呼末二氧化碳分壓，同時(shí)體表加溫，保持肛溫

3、36-37℃。2h后停吸異氟醚，吸入純氧，待大鼠有反應(yīng)后拔除氣管導(dǎo)管，蘇醒完全后放回籠中。對(duì)照組(C組)大鼠不給任何麻醉藥，也不行氣管插管，只置于麻醉箱中吸入氧氣2h，氧流量為2L/min。C組、Ⅰ組和Ⅱ組大鼠分別在篩選后24h、麻醉結(jié)束后24h、麻醉結(jié)束后72h時(shí)，先后經(jīng)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和Y型迷宮測(cè)試行為學(xué)成績(jī)。觀察并記錄各組大鼠曠場(chǎng)箱中央格停留時(shí)間、穿行格數(shù)、直立次數(shù)和總活動(dòng)量，以及Y型迷宮達(dá)學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)總反應(yīng)次數(shù)。然后，分別從三組內(nèi)各隨機(jī)選擇

4、5只大鼠取腦標(biāo)本，做含海馬的冠狀冰凍切片，行UCH-L1免疫組織化學(xué)染色。觀察海馬CA1和CA3區(qū)錐體細(xì)胞UCH-L1的表達(dá)，記錄陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)；并采集圖像對(duì)陽(yáng)性表達(dá)行定量分析，計(jì)算積分光密度值(iOD)。
　　 結(jié)果：大鼠在異氟醚麻醉誘導(dǎo)及維持期間均保持規(guī)律自主呼吸，沒(méi)有嚴(yán)重循環(huán)、呼吸抑制和缺氧征象出現(xiàn)：平均動(dòng)脈壓、心率、呼吸頻率、鼠尾動(dòng)脈脈搏血氧飽和度、呼末二氧化碳分壓、肛溫均維持平穩(wěn)，且在生理學(xué)上可接受的范圍內(nèi)。C組、Ⅰ組和Ⅱ

5、組曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)成績(jī)（包括中央格停留時(shí)間、穿格數(shù)、直立次數(shù)、總活動(dòng)量）比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(各P＞0.05)；而Ⅰ組Y迷宮達(dá)學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)總反應(yīng)次數(shù)明顯多于C組和Ⅱ組(Ⅰ組70.50±16.25 VS C組49.20±8.56、Ⅱ組61.80±23.49；各P＜0.01)，Ⅱ組與C組比較則無(wú)明顯差異(P＞0.05)。三組海馬各區(qū)錐體細(xì)胞層都有數(shù)目不等的UCH-L1陽(yáng)性神經(jīng)元分布，且免疫反應(yīng)物分布在海馬神經(jīng)元整個(gè)樹(shù)突和胞體，呈棕褐色；Ⅰ組與

6、C組和Ⅱ組相比，海馬CA1、CA3區(qū)UCH-L1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P＜0.01)，且胞漿染色變淺，積分光密度值(iOD)降低(P＜0.01)，而Ⅱ組與C組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：吸入異氟醚可致老齡大鼠麻醉后24h空間被動(dòng)回避學(xué)習(xí)記憶能力下降，而72h時(shí)基本恢復(fù)；異氟醚抑制老齡大鼠海馬UCH-L1的表達(dá)，且與其學(xué)習(xí)記憶功能障礙在時(shí)間上具有一致性；異氟醚吸入麻醉致認(rèn)知障礙可能與抑制UCH-L1表達(dá)相關(guān)，其機(jī)制