重組hAG（K1-3）在胃癌基因治療中應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究重組hAG(K1～3)基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況，并檢測其體外對胃癌細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長抑制情況，探討hAG抑制腫瘤生長的原理，研究hAG(K1～3)聯(lián)合TRAIL在體內(nèi)對裸鼠胃癌皮下移植瘤的生長抑制情況，為研究hAG聯(lián)合多基因在腫瘤的基因治療方面的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法：(1)從人肝臟組織中提取總RNA，通過RT-PCR方法獲得hAG(K1～3)基因，將其克隆到真核熒光表達(dá)載體pEGFP-N 1上，構(gòu)建重組質(zhì)粒pE

2、GFP-N1-hAG；(2)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，通過報(bào)告基因熒光蛋白的表達(dá)、RT-PCR和Western blot檢測其融合蛋白在真核細(xì)胞中的表達(dá)；(3)將重組質(zhì)粒pEGFP-N1-hAG通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染處于對數(shù)生長期的人胃癌細(xì)胞及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，MTT法分析hAG(K1～3)基因?qū)煞N細(xì)胞體外增殖的抑制率；(4)通過亞克隆法構(gòu)建重組質(zhì)粒’pBud-hAG及pBud-hAG-TRAIL，將人胃癌細(xì)胞SGC-7901注射裸鼠皮下

3、形成移植瘤，然后將兩種質(zhì)粒分別分次多點(diǎn)注入瘤體內(nèi)，研究其對腫瘤生長抑制情況及對腫瘤血管密度的影響。 結(jié)果：(1)通過RT-PCR方法克隆得到hAG(K1～3)基因片斷，長度為836bp，與目的基因片段大小相一致；(2)重組質(zhì)粒pEGFP-N1-hAG構(gòu)建成功，hAG(K1～3)在真核細(xì)胞中表達(dá)，并與熒光蛋白融合；(3)hAG(K1～3)對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外增值有明顯的抑制作用(P＜0.05)，但對胃癌細(xì)胞無此作用；(4)hA