流式細胞術(shù)研究局灶性大鼠腦缺血再灌注損傷后白細胞滲出和L-選擇素表達.pdf

1、目的：在腦缺血的病理機制中炎癥反應(yīng)起著重要作用，小神經(jīng)膠質(zhì)細胞、巨噬細胞的活化和白細胞的滲出是中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵步驟。腦缺血后炎癥反應(yīng)有兩個過程：小神經(jīng)膠質(zhì)細胞的活化和血管周圍、腦實質(zhì)內(nèi)巨噬細胞的出現(xiàn)；周圍炎癥細胞的游走和滲出。粘附分子介導(dǎo)粘附損傷過程和神經(jīng)細胞損傷的關(guān)系密切。選擇素是血管粘附分子大家族中的一大類成員，參與介導(dǎo)腦缺血再灌注損傷中的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致缺血區(qū)腦組織損傷。其中L-選擇素表達于多種白細胞，是白細胞表面標(biāo)志。本

2、課題研究缺血腦組織的L-選擇素表達和白細胞滲出，以說明L-選擇素介導(dǎo)白細胞滲出在腦缺血再灌注損傷中的作用。 過去已經(jīng)應(yīng)用形態(tài)學(xué)，免疫組化，生物化學(xué)的方法來研究動物模型腦缺血病灶的炎癥反應(yīng)。這些方法在評價炎癥細胞滲出抑制劑的有效性時，通常采用組織切片上細胞計數(shù)的辦法，非常耗時且準(zhǔn)確性欠佳。而與這些方法相比較，應(yīng)用流式細胞術(shù)可以定量和定性分析局灶性鼠腦缺血再灌注模型的炎癥細胞，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點。 材料和方法

3、：采用機械分離法制備腦單細胞懸液。在流式細胞術(shù)中使用如下抗體：FITC-Mouse Anti Rat CD62L，PE-Mouse Anti Rat CD45(白細胞表面抗原)以及相關(guān)同型對照抗體。將66只SD大鼠分為假手術(shù)組，腦缺血再灌注組(模型組)和人工合成E-選擇素干預(yù)組(干預(yù)組)，采用線栓法制備大腦中動脈缺血再灌注模型。缺血2h后，設(shè)再灌注2h、6h、12h、24h、48h組，采用流式細胞術(shù)檢測各組大鼠大腦缺血側(cè)L-選擇素表達、

4、白細胞滲出和分析人工合成E-選擇素的抑制作用。。 結(jié)果：假手術(shù)組無L-selectin和CD45表達；模型組L-selectin在再灌注2h后已經(jīng)表達，再灌注6h達高峰，再灌注24h、48h明顯減少；模型組CD45表達在再灌注12h后表達逐漸增加；與模型組相比，干預(yù)組L-selectin各時間點均下降(P<0.05)，干預(yù)組CD45在再灌注12h、24h、48 h時間點的表達明顯低于缺血再灌注組(P<0.05)。 結(jié)論：

5、大鼠腦缺血再灌注損傷后L-selectin的明顯上調(diào)，說明它介導(dǎo)白細胞和EC的粘附，參與腦缺血再灌注損傷的病理過程。大鼠腦缺血再灌注的早期白細胞滲出較少，再灌注12h～24h開始有較高的表達，后逐漸增多。人工合成E-選擇素能夠明顯抑制L-selectin的表達，達到抑制白細胞與EC的粘附作用，使白細胞的滲出明顯減少，對大鼠腦缺血再灌注損傷起到保護作用。應(yīng)用流式細胞術(shù)來分析鼠腦組織是可行的，能夠快速、可靠地分析局灶性鼠腦缺血再灌注模型的神