荷載SATB-1基因的干擾質(zhì)粒對(duì)人前列腺癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：研究荷載SATB-1基因的干擾質(zhì)粒(pSliencer-SATB-1-shRNA)對(duì)人前列腺癌細(xì)胞(DU145)裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響，為進(jìn)一步探討SATB-1基因在前列腺癌的發(fā)病機(jī)制及轉(zhuǎn)移中的作用奠定基礎(chǔ)，為前列腺癌的基因治療提供依據(jù)。
　　方法：建立裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型，當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)到80-100 mm3（約注射細(xì)胞后10-14天），將其隨機(jī)分3組:分別為A組(PBS組，n=8):瘤體內(nèi)多點(diǎn)注射磷酸鹽緩沖液(PBS

2、)0.1ml/只;B組（空質(zhì)粒pSliencer組，n=8）:瘤體內(nèi)多點(diǎn)注射單純空質(zhì)粒pSliencer0.1ml/只; C組(pSliencer-SATB-1-shRNA組，n=8):瘤體內(nèi)多點(diǎn)注射pSliencer-SATB-1-shRNA0.1ml/只。注射方案:分四次注射，隔天注射，每次0.1ml。在治療結(jié)束的第7天，每組隨機(jī)脫頸處死4只動(dòng)物，取下瘤體組織，免疫組化法檢測(cè)瘤體內(nèi)SATB-1蛋白的表達(dá)，Western檢測(cè)SATB-

3、1蛋白的表達(dá)，HE染色檢測(cè)腫瘤生長(zhǎng)情況，TUNEL法檢測(cè)移植瘤細(xì)胞凋亡，其余動(dòng)物繼續(xù)飼養(yǎng)，每隔三天測(cè)量腫瘤體積，繪制腫瘤時(shí)間-體積生長(zhǎng)抑制曲線，在治療的第25天處死全部動(dòng)物，測(cè)量腫瘤最終體積。
　　結(jié)果：1.成功構(gòu)建人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型;
　　2.免疫組化法顯示:SATB-1蛋白表達(dá)的陽(yáng)性顆粒主要位于細(xì)胞質(zhì)和胞膜上，染色呈棕褐色。而pSliencer-SATB-1-shRNA組與PBS組及空質(zhì)粒組其表達(dá)明顯降低，差異

4、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　3.Western blot檢測(cè)示:PBS組與空質(zhì)粒組SATB-1蛋白表達(dá)水平分別為(98.6±5.73,94.0±4.52)％，而pSliencer-SATB-1-shRNA組為（31.4±5.78)％。與兩對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　4.瘤組織HE染色中PBS組與空質(zhì)粒組腫瘤組織生長(zhǎng)旺盛，細(xì)胞核大小不一，形態(tài)不規(guī)則。而pSliencer-SATB-1-shRNA組

5、與兩對(duì)照組相比，瘤組織內(nèi)死亡細(xì)胞較多，細(xì)胞崩裂為碎片，細(xì)胞核固縮碎裂，正常組織結(jié)構(gòu)消失，提示腫瘤組織生長(zhǎng)抑制;
　　5.TUNEL檢測(cè)各治療組凋亡率分別為PBS組(4.16±1.83)％，空質(zhì)粒pSliencer組(6.84±3.16)％, pSliencer-SATB-1-shRNA組(58.23±6.62)％。pSliencer-SATB-1-shRNA組與兩對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　6.腫瘤生