長爪沙鼠高脂血癥模型的建立及脂代謝相關基因的表達研究.pdf

1、為探索長爪沙鼠高脂血癥易感的基因及其遺傳標記，以用于培育新品系，同時獲得長爪沙鼠高脂血癥的發(fā)病機理，用高脂飼料連續(xù)飼喂4周三月齡雄性長爪沙鼠（體重50～70g），建立長爪沙鼠誘發(fā)型高脂血癥模型。測定CHO/TC、LDL、HDL和TG等七項血液生化指標，制作肝臟病理切片。結(jié)果表明造模一周時動物血清TC、LDL-C和HDL-C均迅速升高，血清脂蛋白以LDL-C升高為主，且穩(wěn)定到第四周，肝臟有明顯的脂肪變性。利用血脂生化檢測(TG、TC、LD

2、L、HDL)，血清脂蛋白瓊脂糖電泳技術共對444只動物進行檢測，結(jié)果自發(fā)高脂血癥的發(fā)病率為10％-30％。病理切片顯示高齡鼠腹壁脂肪增厚，患高脂血癥個體（模型鼠）常規(guī)病理與高脂飼料誘發(fā)的三月齡鼠模型相似;肝臟切片染色顯示有許多大小不等被油紅著色的脂滴分布。相同的飼養(yǎng)條件（環(huán)境，飼料）下8月齡以上的中老年沙鼠TC，TG與7月齡及以下的沙鼠有顯著差別(P＜0.05)。長爪沙鼠中自發(fā)型高脂血癥Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型的頻率分別為14.8％、4

3、4.4％、14.8％、16.7％和3.7％，而高脂飼料誘發(fā)4周及以上的動物為Ⅴ型。正常組與高脂組動物腸菌DGGE圖譜的條帶均數(shù)分別為18.6條和15.2條，高脂動物的腸菌具有較高的相似指數(shù)，表明高脂血癥影響了腸道生物區(qū)系結(jié)構，由此將動物腸道微生物檢測與聚類分析作為評價模型的一種檢測方法。
　　利用RT-PCR和RACE技術，以長爪沙鼠肝臟cDNA為模板克隆apoE與Icat兩個基因全序列。其中apoE基因全長2077 bp，CDS

4、區(qū)長約1135 bp，三個外顯子，兩個內(nèi)含子，編碼316個氨基酸(EU834053)，經(jīng)BLAST比較發(fā)現(xiàn)沙鼠與大鼠、小鼠、人和非人靈類apoE基因的CDS區(qū)的同源性達到了86％、93.6％、79.2％和78％。在444只長爪沙鼠中，用PCR-SSCP檢測到三個SNP:97位(C→T)，781位(G→T)，1774位(A→T)。三個位點的等位基因數(shù)都為2個，遺傳方式基本符合孟德爾定律;期望雜合度分別是0.063、0.501、0.499，

5、全群平均為0.354;PIC分別是0.061、0375、0.374，全群平均0.270，表明在C97T上屬于低度多態(tài)，在G781T和A1774T上屬于高度多態(tài)。遺傳效應分析表明，年齡、性別、營養(yǎng)條件及飼養(yǎng)環(huán)境均與長爪沙鼠封閉群的高脂血癥密切相關。
　　Icat基因包括6個外顯子，5個內(nèi)含予，共3683 bp，CDS區(qū)長約1337bp，該基因共編碼444個氨基酸(KC533867.1)，經(jīng)BLAST比較發(fā)現(xiàn)測序的結(jié)果與大鼠、小鼠、人

6、、豬和牛lcat基因的CDS區(qū)的同源性分別達到了76％、72％、53％及67％以上。大群體PCR-SSCP檢測為單態(tài)。
　　利用apoE和lcat抗體對正常、誘發(fā)高脂模型和高齡組沙鼠（自發(fā)高脂血癥）心、肝、腎、脾、肺、腎上腺和腦等器官進行了檢測，其中apoE基因在各組織中均有表達。lcat免疫組化結(jié)果表明陽性反應僅見于肝、腎、脾、腎上腺組織，在lcat陽性的各種組織中，腎臟的陽性反應最強，高脂飼料誘發(fā)組的陽性反應最強。
　　

7、長爪沙鼠轉(zhuǎn)錄組高通量測序結(jié)果表明，有效unigene基因47522個(≥100 bp的unigene)，大小26.9 Mb，其中長于1000 bp的unigene有8015個。所有詳細信息注釋上NR、SWISS-PROT、CDD、PFAM和TREMBL庫的基因分別有51.43％、49.20％、50.93％、32.65％和44.19％。有693個gene被注釋到24種COG分類中，GO注釋上的基因共有12914個，注釋的酶數(shù)為1004個，