長(zhǎng)爪沙鼠高脂血癥模型的建立及脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)研究.pdf

1、為探索長(zhǎng)爪沙鼠高脂血癥易感的基因及其遺傳標(biāo)記，以用于培育新品系，同時(shí)獲得長(zhǎng)爪沙鼠高脂血癥的發(fā)病機(jī)理，用高脂飼料連續(xù)飼喂4周三月齡雄性長(zhǎng)爪沙鼠（體重50～70g），建立長(zhǎng)爪沙鼠誘發(fā)型高脂血癥模型。測(cè)定CHO/TC、LDL、HDL和TG等七項(xiàng)血液生化指標(biāo)，制作肝臟病理切片。結(jié)果表明造模一周時(shí)動(dòng)物血清TC、LDL-C和HDL-C均迅速升高，血清脂蛋白以LDL-C升高為主，且穩(wěn)定到第四周，肝臟有明顯的脂肪變性。利用血脂生化檢測(cè)(TG、TC、LD

2、L、HDL)，血清脂蛋白瓊脂糖電泳技術(shù)共對(duì)444只動(dòng)物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果自發(fā)高脂血癥的發(fā)病率為10％-30％。病理切片顯示高齡鼠腹壁脂肪增厚，患高脂血癥個(gè)體（模型鼠）常規(guī)病理與高脂飼料誘發(fā)的三月齡鼠模型相似;肝臟切片染色顯示有許多大小不等被油紅著色的脂滴分布。相同的飼養(yǎng)條件（環(huán)境，飼料）下8月齡以上的中老年沙鼠TC，TG與7月齡及以下的沙鼠有顯著差別(P＜0.05)。長(zhǎng)爪沙鼠中自發(fā)型高脂血癥Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型的頻率分別為14.8％、4

3、4.4％、14.8％、16.7％和3.7％，而高脂飼料誘發(fā)4周及以上的動(dòng)物為Ⅴ型。正常組與高脂組動(dòng)物腸菌DGGE圖譜的條帶均數(shù)分別為18.6條和15.2條，高脂動(dòng)物的腸菌具有較高的相似指數(shù)，表明高脂血癥影響了腸道生物區(qū)系結(jié)構(gòu)，由此將動(dòng)物腸道微生物檢測(cè)與聚類分析作為評(píng)價(jià)模型的一種檢測(cè)方法。
　　利用RT-PCR和RACE技術(shù)，以長(zhǎng)爪沙鼠肝臟cDNA為模板克隆apoE與Icat兩個(gè)基因全序列。其中apoE基因全長(zhǎng)2077 bp，CDS

4、區(qū)長(zhǎng)約1135 bp，三個(gè)外顯子，兩個(gè)內(nèi)含子，編碼316個(gè)氨基酸(EU834053)，經(jīng)BLAST比較發(fā)現(xiàn)沙鼠與大鼠、小鼠、人和非人靈類apoE基因的CDS區(qū)的同源性達(dá)到了86％、93.6％、79.2％和78％。在444只長(zhǎng)爪沙鼠中，用PCR-SSCP檢測(cè)到三個(gè)SNP:97位(C→T)，781位(G→T)，1774位(A→T)。三個(gè)位點(diǎn)的等位基因數(shù)都為2個(gè)，遺傳方式基本符合孟德爾定律;期望雜合度分別是0.063、0.501、0.499，

5、全群平均為0.354;PIC分別是0.061、0375、0.374，全群平均0.270，表明在C97T上屬于低度多態(tài)，在G781T和A1774T上屬于高度多態(tài)。遺傳效應(yīng)分析表明，年齡、性別、營(yíng)養(yǎng)條件及飼養(yǎng)環(huán)境均與長(zhǎng)爪沙鼠封閉群的高脂血癥密切相關(guān)。
　　Icat基因包括6個(gè)外顯子，5個(gè)內(nèi)含予，共3683 bp，CDS區(qū)長(zhǎng)約1337bp，該基因共編碼444個(gè)氨基酸(KC533867.1)，經(jīng)BLAST比較發(fā)現(xiàn)測(cè)序的結(jié)果與大鼠、小鼠、人

6、、豬和牛lcat基因的CDS區(qū)的同源性分別達(dá)到了76％、72％、53％及67％以上。大群體PCR-SSCP檢測(cè)為單態(tài)。
　　利用apoE和lcat抗體對(duì)正常、誘發(fā)高脂模型和高齡組沙鼠（自發(fā)高脂血癥）心、肝、腎、脾、肺、腎上腺和腦等器官進(jìn)行了檢測(cè)，其中apoE基因在各組織中均有表達(dá)。lcat免疫組化結(jié)果表明陽(yáng)性反應(yīng)僅見于肝、腎、脾、腎上腺組織，在lcat陽(yáng)性的各種組織中，腎臟的陽(yáng)性反應(yīng)最強(qiáng)，高脂飼料誘發(fā)組的陽(yáng)性反應(yīng)最強(qiáng)。
　　

7、長(zhǎng)爪沙鼠轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序結(jié)果表明，有效unigene基因47522個(gè)(≥100 bp的unigene)，大小26.9 Mb，其中長(zhǎng)于1000 bp的unigene有8015個(gè)。所有詳細(xì)信息注釋上NR、SWISS-PROT、CDD、PFAM和TREMBL庫(kù)的基因分別有51.43％、49.20％、50.93％、32.65％和44.19％。有693個(gè)gene被注釋到24種COG分類中，GO注釋上的基因共有12914個(gè)，注釋的酶數(shù)為1004個(gè)，