貓備用背根節(jié)內NT-3和相關神經(jīng)肽的表達及其作用探討.pdf

1、在胚胎早期神經(jīng)營養(yǎng)素-3(neurotrophin-3，NT-3)對神經(jīng)元的存活、突起生長及靶選擇發(fā)揮著重要的作用，隨著胚胎的發(fā)育其表達逐漸減少，功能作用也隨之減弱。在成年動物神經(jīng)損傷后，NT-3的表達再次增高，參與到損傷修復的過程中。有實驗顯示成年貓部分背根損傷后備用背根節(jié)中NT-3mRNA表達上調，同時保留的備用背根在脊髓內發(fā)生了側支出芽，以代償丟失的初級傳入纖維，提示增多的NT-3很可能參與了上述的代償、修復過程。

2、 為了探明成年貓正常背根節(jié)和部分去背根后備用背根節(jié)內源性NT-3對節(jié)內神經(jīng)元的作用和作用模式，NT-3對備用背根側支出芽的影響，以及背根節(jié)內與NT-3功能可能有相關關系的神經(jīng)肽的表達及作用，本文采用CTB神經(jīng)束路追蹤、分離神經(jīng)元培養(yǎng)、免疫組織化學、免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附等技術從三個方面進行研究：NT-3促背根節(jié)神經(jīng)突起生長作用探討；備用背根節(jié)內NT-3表達的變化及作用模式探討；背根節(jié)神經(jīng)元內NT-3與肽類物質的共存及相關作用的探討。

3、 實驗結果如下： 第一部分：CTB追蹤結果顯示成年貓脊髓L<,5>～L<,2>節(jié)段橫切片中，左右兩側的背索中均可見到CTB標記的有髓神經(jīng)纖維斷面，各節(jié)段手術側背索中的標記纖維均多于非手術側，提示備用背根有明顯的側支出芽。培養(yǎng)的成年貓備用背根節(jié)組神經(jīng)元存活細胞數(shù)及神經(jīng)突起的數(shù)量和長度明顯多于正常背根節(jié)組和備用背根節(jié)加抗NT-3抗體封閉組。提示背根節(jié)內源性NT-3有維持節(jié)內神經(jīng)元存活、促進神經(jīng)突起生長的作用，備用背根節(jié)內可能增多

4、的NT-3使這一作用表現(xiàn)得更為明顯。 第二部分：免疫組化結果顯示，成年貓背根節(jié)部分神經(jīng)元表達NT-3或TrkC，在部分背根切斷后備用背根節(jié)中表達NT-3或TrkC的神經(jīng)元數(shù)目明顯增多，EIISA也檢測到NT-3含量顯著增加，提示部分背根損傷后，備用背根節(jié)內NT-3的表達增強。結合第一部分培養(yǎng)結果可以認為備用背根節(jié)中增多的NT-3強化了其維持節(jié)內神經(jīng)元存活和促進神經(jīng)突起生長的功能。背根節(jié)連續(xù)切片的免疫組化顯示，成年貓背根節(jié)中部分神

5、經(jīng)元既表達NT-3又表達TrkC，而部分神經(jīng)元僅表達NT-3。提示背根節(jié)內的NT-3可能通過自分泌和旁分泌兩種模式發(fā)揮作用。 第三部分：免疫組化結果顯示，部分背根損傷后7天備用背根節(jié)中NPY免疫反應陽性神經(jīng)元數(shù)目減少，只足還沒有統(tǒng)計學意義；CGRP免疫反應陽性神經(jīng)元數(shù)目增多。這些小同的改變可能都與備用背根節(jié)內NT-3表達增高有關。背根節(jié)連續(xù)切片的免疫組化顯示NT-3分別與NPY、CGRP共存于成年貓背根節(jié)部分神經(jīng)元中，進一步揭示

6、NT-3可能與這兩種神經(jīng)肽在功能方面有相關性。部分去背根后NT-3和這兩種神經(jīng)肽表達的平行變化提示這些神經(jīng)肽可能與損傷過程或者損傷修復過程有關。 本研究的結論是： 成年貓背根節(jié)內NT-3可能以自分泌和旁分泌方式作用于TrkC受體，從而發(fā)揮維持節(jié)內神經(jīng)元存活、促進其突起生長的作用。部分背根損傷后備用背根節(jié)內源性NT-3與其受體TrkC平行上調，強化其神經(jīng)營養(yǎng)作用，可能是促進備用背根中有髓神經(jīng)纖維側支出芽的重要因素。NPY、