不同留針時間的針刺誘導(dǎo)對新生兒鼠缺血缺氧性腦損傷腦內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:為了規(guī)范針灸治療,客觀、科學(xué)地評定療效,擬利用中醫(yī)基礎(chǔ)理論,結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究方法,利用缺血缺氧腦損傷的新生動物模型、利用分子生物學(xué)、免疫學(xué)技術(shù)觀察不同針刺時間下的大腦神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化情況,探討針刺治療新生兒缺血缺氧腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)的機(jī)制,明確針刺治療本病的最佳的時效。為針刺治療HIE提供科學(xué)、扎實(shí)的理論依據(jù),為HIE的綜合治療尋找更適合小兒特點(diǎn)的安全、實(shí)用的有效

2、方法。
　　材料與方法:健康新生7天SD大鼠雌雄不拘,體重12g-14g,,隨機(jī)分為正常(空白)對照組24只、模型組24只、快速刺不留針組(速刺)24只、留針30min組24只,后三組結(jié)扎左側(cè)頸總動脈并缺氧2小時制作新生兒鼠缺血缺氧性腦病模型。每組又分為3天組、7天組、14天組和28天組,分別于術(shù)后第3天、第7天、第14天和第28天進(jìn)行取材;四組同時于各觀察點(diǎn)取材。四組的喂養(yǎng)條件相同。針刺方法:選任脈、督脈穴位,分別給與快速刺不留

3、針、留針30min,每天一次。正常對照組和模型對照組不做針刺處理。各組動物取材前2小時腹腔注射Brdu(5—溴脫氧尿嘧啶核苷)用于標(biāo)記腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況。分別于模型建立后3d、7d、14d和28d后,運(yùn)用神經(jīng)功能缺損評分和HE染色觀察動物的神經(jīng)功能癥狀與腦損傷病理改變;免疫組化觀察大鼠缺血缺氧側(cè)海馬齒狀回(DG)、室管膜下區(qū)(SVZ)的5-溴脫氧尿嘧啶核苷(Brdu),巢蛋白(Nestin)的改變,檢測腦缺血缺氧后神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量及

4、其增殖,從而評價速刺、留針對腦缺血缺氧損傷后神經(jīng)干細(xì)胞的影響作用。
　　結(jié)果:1、速刺、留針對HIE大鼠神經(jīng)功能缺損評分的影響:經(jīng)Kruskal-Walhs檢驗(yàn)(正常對照組不計(jì)其中),各個手術(shù)組大鼠術(shù)后28天的神經(jīng)功能癥狀較第1天明顯減輕(P＜0.01)。在各組之間的兩兩比較中,速刺組和留針組大鼠的神經(jīng)功能癥狀在術(shù)后14、17、21、28天比模型組明顯減輕,與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。2、速刺和留針對HIE大鼠腦組織

5、形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響:模型對照組:左腦海馬可見局灶狀壞死,壞死區(qū)域胞核縮小呈凝固狀,壞死灶周圍正常組織結(jié)構(gòu)層次清晰;左腦枕葉皮層可見大片組織結(jié)構(gòu)模糊的壞死區(qū)域;速刺治療組:大部分腦神經(jīng)細(xì)胞變性,少量腦神經(jīng)細(xì)胞變性壞死;留針治療組:大部分腦神經(jīng)細(xì)胞尚好,少量腦神經(jīng)細(xì)胞變性壞死,3、速刺和留針對HIE模型大鼠腦組織BrdU蛋白表達(dá)的影響:與正常對照組比較,模型對照組大鼠大腦DG和SVZ區(qū)BrdU蛋白的表達(dá)顯著增加(P＜0.01);速刺和留針均可使

6、BrdU蛋白的表達(dá)上調(diào)。與模型對照組比較,速刺治療組和留針治療組BrdU蛋白的表達(dá)增加(P＜0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。速刺治療組和留針治療組比較,術(shù)后3d、7d時BrdU蛋白的表達(dá)無顯著差異(P＞0.05),術(shù)后14d、28dBrdU蛋白的表達(dá)具有顯著性差異(P＜0.05),留針治療組表達(dá)高于速刺治療組。4、速刺和留針對HIE模型大鼠腦組織Nestin蛋白表達(dá)的影響:與正常對照組相比較,模型對照組大鼠大腦DG和SVZ區(qū)Nestin蛋白

7、的表達(dá)顯著增加(P＜0.01);與模型對照組比較,速刺治療組和留針治療組Nestin蛋白的表達(dá)增加(P＜0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。速刺治療組和留針治療組比較,術(shù)后3d、7d時Nestin蛋白的表達(dá)無顯著差異(P＞0.05),術(shù)后14d.28dNestin蛋白的表達(dá)具有顯著性差異(P＜0.05),留針治療組表達(dá)高于速刺治療組。
　　結(jié)論:1、速刺和留針刺能夠促進(jìn)HIE大鼠肢體功能康復(fù),神經(jīng)功能缺損評分有明顯改善。2、速刺和留針刺能

8、使HIE大鼠DG區(qū)和SVZ區(qū)BrdU陽性胞增殖更明顯,表明速刺和留針刺使這兩個區(qū)域增殖活性增加。3、速刺和留針刺能使HIE大鼠DG區(qū)和SVZ區(qū)Nestin陽性胞增殖更明顯,表明速刺和留針刺促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖。4、速刺和留針刺對HIE大鼠DG區(qū)和SVz區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的影響早期無差別;第14d及第28d時留針刺組優(yōu)于速刺組。5、本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,速刺和留針刺能促進(jìn)腦缺血缺氧后神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化,促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞修復(fù),減輕功能缺損程度,這可能是