人涎腺腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及其凋亡的光學(xué)成像.pdf_第1頁(yè)
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1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文人涎腺腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及其凋亡的光學(xué)成像姓名:熊濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師:駱清銘20050719II可以從時(shí)間和空間上反映腫瘤生長(zhǎng)及細(xì)菌消長(zhǎng)的全過(guò)程,因而這兩種模型與活體光學(xué)成像的結(jié)合可以為腫瘤治療藥物和細(xì)菌抗生素篩選提供了一個(gè)很好的研究平臺(tái)?;谝陨涎芯浚覀冇掷霉鈱W(xué)成像系統(tǒng)和GFP標(biāo)記技術(shù)來(lái)研究HSVtkACV系統(tǒng)活體內(nèi)外殺傷ACCM腫瘤細(xì)胞的情況。標(biāo)有GFP的自殺基因TK轉(zhuǎn)染ACCM

2、細(xì)胞,通過(guò)G418篩選出單克隆株ACCMTKGFP;然后利用核酸類似物無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷(ACV)進(jìn)行體內(nèi)外誘導(dǎo)ACCMTKGFP腫瘤細(xì)胞,通過(guò)熒光顯微鏡、整體光學(xué)成像系統(tǒng)及體視熒光顯微鏡來(lái)評(píng)價(jià)治療效果。發(fā)現(xiàn)合適濃度的ACV藥物在細(xì)胞水平上只對(duì)轉(zhuǎn)有TK基因的ACCM起作用,誘導(dǎo)其凋亡;在裸鼠體內(nèi),也只對(duì)轉(zhuǎn)有TK基因的ACCM起到治療作用,并且還發(fā)現(xiàn)采用ACV治療ACCMTKGFP腫瘤時(shí),毛細(xì)血管由豐富逐漸變少,直到腫瘤死亡后消失。這些結(jié)果表明利用

3、光學(xué)成像可以很好地反映ACV活體內(nèi)外殺傷ACCM腫瘤細(xì)胞的療效,因而光學(xué)成像在研究疾病、監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)和評(píng)價(jià)藥物作用效果上越來(lái)越重要。研究腫瘤細(xì)胞凋亡是治療腫瘤疾病的有效途徑,因此在研究ACCM腫瘤細(xì)胞凋亡時(shí),采用光學(xué)成像系統(tǒng)和熒光蛋白基因標(biāo)記腫瘤細(xì)胞的技術(shù)來(lái)研究HSVtkACV系統(tǒng)活體內(nèi)外誘導(dǎo)ACCM腫瘤細(xì)胞凋亡的情況。利用本室構(gòu)建的基于Caspase酶的指示劑CD3質(zhì)粒與HSVtkACV系統(tǒng)結(jié)合通過(guò)FRET技術(shù)來(lái)揭示細(xì)胞凋亡。CD3質(zhì)

4、粒由CFP、DVED(Caspase3特異性酶切位點(diǎn))和DsRed(紅色熒光蛋白)組成。采用ACV藥物誘導(dǎo)表達(dá)TKGFPCD3的ACCM腫瘤細(xì)胞、CD3的ACCM腫瘤細(xì)胞及表達(dá)TKGFP和CD3的混合ACCM腫瘤細(xì)胞,熒光能量共振轉(zhuǎn)移(FRET)成像檢測(cè)分析出ACV藥物能夠誘導(dǎo)轉(zhuǎn)有TK基因的ACCM腫瘤細(xì)胞凋亡,對(duì)僅轉(zhuǎn)有CD3質(zhì)粒的ACCM腫瘤細(xì)胞沒(méi)有影響,并且還證實(shí)了TK基因具有旁觀者效應(yīng)。這種技術(shù)的結(jié)合有望用于腫瘤細(xì)胞的藥物篩選。關(guān)

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