突變型Aβ1-35多肽刺激樹突狀細(xì)胞制備AD疫苗的探討.pdf

1、摘要摘要目的:探討由 突變 型乙型淀粉樣蛋白 1 - 3 5多 膚 ( A p 1 - 3 5 ) 刺激樹突狀細(xì)胞( D e n d r i t i c c e l l , D C ) 來 制備新型阿 爾茨 海默 病 ( A l z h e i m e r ' s d i s e a s e , A D ) 疫 苗的可行性。方法:1 . 采用G M - C S F , I L 一體外 誘導(dǎo)小鼠 骨 髓 細(xì) 胞的 方法來

2、分 離、 培養(yǎng)D C .2 . 采用流 式 細(xì) 胞 儀檢測 細(xì)胞表面 標(biāo) 志C D 1 1 c , C D 8 6 , M H C - C l a s s l l 和C D 8 0 的方 法 對D C 進(jìn) 行 鑒 定 。 3 . 用 包含F(xiàn) l e m i s h 和D u t c h 雙 突 變的A p 1 - 3 5 多 膚( P F D MA 盯 - 3 5 ) 刺 激D C ， 構(gòu) 建D C疫 苗 。 4 . 采 用 腹 腔

3、 注 射的 方法， 使 用 構(gòu) 建 的D C疫苗 對B A L B / c 小鼠 進(jìn)行免疫接種， 同時 設(shè) 立 野 生 型A p 1 - 3 5 多 膚( P W T A 0 1 - 3 5 )致 敏的D C 、 單 純D C 和P F D M A 哪 - 3 5 多 膚 + 佐 劑 作為 對照， 采 用間 接E L I S A法測定血清中的 抗體滴度。結(jié)果:1 . 成功確立 小鼠 骨髓來源D C的分離、 培養(yǎng)方法， 細(xì)胞形態(tài) 及表面

4、 標(biāo)志分子C D 1 1 c , C D 8 6 , M H C - C l a s s l l 和C D 8 0 的 表 達(dá)符合典型 D C性狀，同 時確立理想的G M - C S F 和 I L 一濃度均為 1 0 U / m l .2 . D C 經(jīng)P W T A 盯 - 3 5 和P F D M A R 1 - 3 5 刺 激 后 ， 經(jīng)流 式 細(xì) 胞 儀 檢 測 ， 其 成熟 度增 加。3 . 成 功 建 立 檢 測

5、 血 清 抗A p 抗 體 的 間 接E L I S A 法 .4 . 各組小鼠 免疫接種后， 分別 在第7 , 1 4 , 2 1 , 2 8 天取血測定 血清中的 抗A p 抗 體 滴 度 ， 結(jié) 果 顯 示 : 第7 天 ， P F D M A ( 3 i - 3 5 + 佐 劑 就 能 誘 導(dǎo) 高 滴 度 抗 體 ， 且隨 著 時間 延 長， 抗 體 滴度持續(xù) 升 高， 而P F D M A 邵 - 3 5 致敏D C

6、組、 P W T A 甲 - 3 5致敏D C組與D C 對照組沒有明 顯的 差異。結(jié)論:突 變型A p 1 - 3 5 + 氟氏 佐劑的 免 疫 方 法 能 迅 速 產(chǎn)生 高 滴度的A p 抗 體， 而 用‘ P F D M A 邵 - 3 5 致 敏 的D C 并 未 產(chǎn) 生 相 應(yīng) 的 抗 體 ， 其 原 因 仍 值 得 進(jìn) 一 步 探 討。關(guān)鍵 詞: 樹突 狀 細(xì) 胞; 阿爾茨海默 病; 突 變型A }符號說明符號說明英文縮寫

7、 英文名稱 中文名稱A PADA P CAP PCB CDC sDMS OE L I S AF BSF C MF I T CCM- CS FHRPI gI L - 4P BSP EP E - c y 5P F DMP W T甲mR P MI - 1 6 4 0T M BA m y l o i d b e t aAl z h e i m e r ' s d i s e a s eA l l o p h y c o c y a

8、n i nA m y l o i d p r e c u r s o r p r o t e i nC a r b o n a t e b i c a r b o n a t e b u f e rD e n d r i f i c c e l l sD i m e t h y l s u l p h o x i d eE n z y m e l i n k e d i m m u n o s o r b e n t

9、a s s a yF e t a l b o v i n e s e r u mF l o w c y t o m e t e rF l u o r e s c e i n i s o t h i o c y a n a t eG r a n u l o c y t e - m a c r o p h a g e c o l o n y - s t i m u l a t i n g f a c t o r H o r s e

10、 r a d i s h p e r o x i d a s eI m m u n o g l o b u l i nI n t e r l e u k i n - 4P h o s p h a t e - b u f e r e d s o l u t i o nP h y c o e r y t h r i n P h y c o e r y t h r i n 一 y a n i n eF l e m i s h a n d

11、 D u t c h m u t a n t p e p t i d e W i l d t y p e p e p t i d er o t a t i o n p e r m i n u t eR P MI - 1 6 4 0 me d i u mT e t r a m e t h y l b e n z i d i n e乙型淀粉樣蛋白阿 爾茨 海默 病別藻藍(lán)蛋白淀粉樣前體蛋白碳酸鹽 一 碳酸 氫鹽緩沖 液樹突狀