顱骨鉆孔法在SSST大鼠模型的應(yīng)用及評(píng)價(jià).pdf

1、目的：
　　觀察顱骨鉆孔法在 SSST大鼠模型中的應(yīng)用，通過(guò)了解 CNS中的腦紅蛋白、Caspase-3的表達(dá)情況，與其他兩種方法比較進(jìn)行評(píng)價(jià)，從而探討一種成功穩(wěn)定、易于復(fù)制、對(duì)大鼠腦損傷程度輕的SSST大鼠模型。為后續(xù)的研究開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　方法：
　　采用SD大鼠63只根據(jù)完全隨機(jī)原則每組21只分為：開(kāi)顱后于上矢狀竇中后1/3內(nèi)注入 Activated Cephaloplastin Reagent（A組），開(kāi)

2、顱后結(jié)扎上矢狀竇中后1/3及回流靜脈加注入Activated Cephaloplastin Reagent（B組），顱骨鉆孔于上矢狀竇中后1/3內(nèi)注入Activated Cephaloplastin Reagent（C組），其中A組分為A1（8h）、A2（24h）、A3（72h）三個(gè)亞組，B組分為B1（8h）、B2（24h）、B3（72h）三個(gè)亞組， C組分為 C1（8h）、C2（24h）、C3（72h）三個(gè)亞組,造模成功后，分別于8h

3、、24h、72h對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分、處死、固定、取材；尼氏染色、HE染色觀察其細(xì)胞形態(tài)；免疫組化檢測(cè)腦紅蛋白和caspase-3的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1．三組模型神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分結(jié)果：三組模型在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差異，經(jīng)單因素方差分析，結(jié)果都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001，F(xiàn)=10.520）、（P=0.000，F(xiàn)=12.229）、（P=0.001，F(xiàn)=11.641），說(shuō)明三組模型的神經(jīng)功能缺損程度隨著時(shí)間呈遞增趨勢(shì)。A、

4、B、C三組模型之間的神經(jīng)功能缺損程度的評(píng)分的差異，結(jié)果在8小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，三組之間經(jīng)兩兩比較，其中B組與A組之間具有差異（P<0.05）， B組與C組有差異（P<0.05），但A組與C組比較無(wú)差異（P>0.05），以B組的缺損程度最大；
　　2.腦組織水含量測(cè)定：三組模型在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差異，經(jīng)單因素方差分析，結(jié)果都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.003，F(xiàn)=8.425）、（P=0.000，F(xiàn)=16.740）、（P=0

5、.002，F(xiàn)=9.129），說(shuō)明三組模型的竇旁腦組織水含量于術(shù)后8小時(shí)組竇旁腦組織水含量增加，24小時(shí)組竇旁腦組織水含量進(jìn)一步升高,72小時(shí)組竇旁腦組織水含量達(dá)到高峰全腦出現(xiàn)水腫。A、B、C三組模型之間的竇旁腦組織水含量的差異，結(jié)果在8小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，三組之間經(jīng)兩兩比較，其中B組與A組之間具有差異（P<0.05）， B組與C組有差異（P<0.05），但A組與C組比較無(wú)差異（P>0.05），以B組的腦組織水含量最顯

6、著；
　　3.腦組織切片HE染色顯示：三組模型HE染色顯示8小時(shí)、24小時(shí)組腦組織水腫明顯,神經(jīng)元變性,表現(xiàn)為核固縮,部分細(xì)胞致密、深染,突起消失,血管間隙增寬,可見(jiàn)血管擴(kuò)張。72小時(shí)組可見(jiàn)神經(jīng)元稀少，細(xì)胞間距增大,大片神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，可見(jiàn)紅細(xì)胞滲出多；
　　4.腦組織切片尼氏染色顯示：三組模型尼氏染色表現(xiàn)為深藍(lán)色顆粒或斑塊狀(形如虎斑)的尼氏體數(shù)量由8小時(shí)組至72小時(shí)組逐漸減少,細(xì)胞核為藍(lán)色,染色背景為淡藍(lán)色；
　

7、　5.Caspase-3免疫組化染色：三組模型在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差異，經(jīng)單因素方差分析，結(jié)果都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000，F(xiàn)=164.671）、（P=0.000，F(xiàn)=34.760）、（P=0.000， F=71.523），說(shuō)明三組模型腦組織Caspase-3的表達(dá)于術(shù)后8小時(shí)組Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加；24小時(shí)組Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)達(dá)峰值；72小時(shí)組Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)緩慢下降，較24小時(shí)組減少但較8小時(shí)組增加。A

8、、B、C三組模型之間腦組織Caspase-3表達(dá)的差異，結(jié)果在8小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，三組之間經(jīng)兩兩比較，其中B組與A組之間具有差異（P<0.05），B組與C組有差異（P<0.05），但A組與C組比較無(wú)差異（P>0.05），以B組腦組織Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多。
　　6.腦紅蛋白免疫組化染色：三組模型在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差異，經(jīng)單因素方差分析，結(jié)果都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.003，F(xiàn)=8.418）、（P=0.00

9、0，F(xiàn)=13.689）、（P=0.000， F=22.033），說(shuō)明三組模型腦組織腦紅蛋白的表達(dá)隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，NGB蛋白免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)呈逐漸減少。A、B、C三組模型之間腦組織腦紅蛋白表達(dá)的差異，結(jié)果在8小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，三組之間經(jīng)兩兩比較，其中B組與A組之間具有差異（P<0.05），B組與C組有差異（P<0.05），但A組與C組比較無(wú)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.顱骨鉆孔法制作S