shRNA介導PIAS3基因表達下調(diào)對人結(jié)腸癌COLO205細胞株增殖和調(diào)亡的影響.pdf

1、目的：檢測取自人體不同部位、不同Dukes分期的人結(jié)腸癌細胞株SW480（取自結(jié)腸癌組織，Dukes B期）、SW620（取自結(jié)腸癌淋巴轉(zhuǎn)移組織，Dukes C期）及COLO205（取自結(jié)腸癌腹腔轉(zhuǎn)移腹水組織，Dukes D期）中PIAS3的表達水平，篩選PIAS3相對高表達細胞株進行shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染干預實驗；通過轉(zhuǎn)染PIAS3 shRNA質(zhì)粒，下調(diào)結(jié)腸癌細胞株中PIAS3基因的表達水平，研究該基因的差異性表達對結(jié)腸癌細胞增殖活性、調(diào)

2、亡和細胞周期的影響。
　　方法：運用實時熒光定量PCR（Real-Time PCR）及蛋白免疫印跡（Western blot）檢測SW480、SW620及COLO205三種人結(jié)腸癌細胞株中PIAS3基因的表達水平；運用脂質(zhì)體介導將PIAS3shRNA質(zhì)粒及無關序列shRNA對照質(zhì)料轉(zhuǎn)染入人結(jié)腸癌細胞株，干預后區(qū)分為：PIAS3shRNA轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染PIAS3shRNA質(zhì)粒）、無關序列shRNA轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染無關序列對照質(zhì)粒）及空白對

3、照組（不進行轉(zhuǎn)染干預）；采用Real-Time PCR、Western blot檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染干預后 PIAS3基因的抑制效果；MTT（噻唑藍）法檢測PIAS3表達下調(diào)對結(jié)腸癌細胞增殖活性的影響；流式細胞儀檢測 PIAS3表達下調(diào)對人結(jié)腸癌細胞周期和調(diào)亡的影響。
　　結(jié)果：Real-Time PCR和Western blot檢測顯示，PIAS3在三種結(jié)腸癌細胞株中均呈陽性表達，而在COLO205細胞株中的表達水平顯著高于其它兩種細胞

4、株，因此選擇COLO205細胞進行shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染干預實驗。與空白對照組及無關序列shRNA轉(zhuǎn)染組相比，PIAS3shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組COLO205細胞PIAS3基因在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達明顯降低。MTT分析顯示與無關序列 shRNA轉(zhuǎn)染組及空白對照組比較，PIAS3shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組COLO205細胞增殖活性明顯增強。流式細胞儀分析顯示，PIAS3shRNA轉(zhuǎn)染組與無關序列shRNA轉(zhuǎn)染組及空白對照組相比，細胞增殖明顯增快，

5、G1、G2期細胞所占比例均減少，S期細胞所占比例顯著增多，細胞總調(diào)亡率明顯減少。
　　結(jié)論：PIAS3在SW480、SW620及COLO205三種結(jié)腸癌細胞株中均有表達。PIAS3shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染能有效抑制 PIAS3基因在結(jié)腸癌細胞株中的表達水平。PIAS3表達水平下調(diào)后，人結(jié)腸癌細胞的增殖活性增強，促進細胞的增殖和分裂，抑制其調(diào)亡。PIAS3是抑癌基因的論述，在人結(jié)腸癌中通過本實驗得到進一步的論證，為深入研究 PIAS3作為