CD40 5’-非翻譯區(qū)域-1C-T基因多態(tài)性與HBV感染的相關(guān)性研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界上最常見的病毒感染性疾病，全世界約有3.5億人感染。大部分成年人能夠在感染后清除病毒，僅5-10％的感染者發(fā)展為慢性肝炎。然而病毒的致病機(jī)理尤其是慢性化的原因仍是個(gè)迷，目前認(rèn)為乙型肝炎感染后臨床表現(xiàn)的多樣性和復(fù)雜性主要由病毒自身，機(jī)體的遺傳因素和免疫反應(yīng)及環(huán)境等綜合因素所致。很多研究表明個(gè)體的遺傳背景導(dǎo)致HBV感染后的不同轉(zhuǎn)歸。 CD40／CD40L是一對(duì)重要的免疫細(xì)胞表面分子，在細(xì)胞和體液免疫中

2、發(fā)揮了重要的作用。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)CD40基因5’-非翻譯區(qū)域-1C／T多態(tài)性與一些疾病的發(fā)生發(fā)展乃至預(yù)后密切相關(guān)，但至今未在HBV感染患者中進(jìn)行研究。本課題對(duì)CD40基因-1C／T多態(tài)性與HBV感染的相關(guān)性進(jìn)行了研究，并且對(duì)其與血清可溶性CD40(sCD40)的表達(dá)水平的關(guān)系進(jìn)行探討，進(jìn)一步從基因水平上認(rèn)識(shí)HBV感染的發(fā)病機(jī)理，為乙型肝炎的防治提供新的理論依據(jù)和視角。 第一部分 CD40基因5’-非翻譯區(qū)域-1C／T多態(tài)性與HB

3、V感染的相關(guān)性研究 目的：研究CD40基因5’-非翻譯區(qū)域(UTR)-1C／T多態(tài)性與HBV感染的相關(guān)性。 方法：選取慢性乙型肝炎患者132例，重型肝炎35例，HBV攜帶者59例，同期健康體檢者135例為研究對(duì)象，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶切片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分析其CD40基因-1C／T多態(tài)性。進(jìn)一步采用重疊PCR和分子克隆技術(shù)構(gòu)建了CD40 5’UTR-1C／T—EGFP融合基因載體，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

4、cos-7細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EGFP蛋白的表達(dá)，探討CD40基因5’-非翻譯區(qū)域-1C／T多態(tài)性對(duì)蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：HBV攜帶者CC基因型及C等位基因分布頻率(分別為27.1％，50.2％)顯著低于正常對(duì)照組(分別為43.7％，65.6％)，而TT基因型則顯著高于正常對(duì)照組(分別為25.4％，12.6％)。慢性乙型肝炎患者和正常對(duì)照組CC，CT和TT基因型分布差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。重型肝炎患者和慢乙肝患者CC基因型及C等位基

5、因高于HBV攜帶者，但均低于正常組，三組之間基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。流式細(xì)胞儀檢測(cè)EGFP平均熒光強(qiáng)度，結(jié)果顯示CD405’UTR-1C-EGFP平均熒光強(qiáng)度顯著高于CD40 5’UTR-1T-EGFP。 結(jié)論：CD40 5’-非翻譯區(qū)域(UTR)-1C／T基因多態(tài)性可能是影響HBV感染后不同臨床結(jié)局的重要宿主遺傳因素之一。CD40 5’UTR-1C／T基因多態(tài)性影響CD40蛋白的表達(dá)效率，不同基因型之間CD40表

6、達(dá)水平的差異可能通過CD40／CD40L相互作用，繼而影響抗HBV免疫應(yīng)答過程。 第二部分 CD40 5’-非翻譯區(qū)域-1C／T基因多態(tài)性與慢性乙型肝炎患者血清可溶性CD40的相關(guān)性研究 目的：研究慢性乙型肝炎患者血清可溶性CD40(sCD40)水平，探討其與CD40基因5’-非翻譯區(qū)域-1C／T基因多態(tài)性的關(guān)系。 方法：選取64例慢性乙型肝炎患者，24例健康體檢者為研究對(duì)象，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELASA)方

7、法檢測(cè)血清中sCD40的表達(dá)水平。應(yīng)用PCR-RFLP方法分析CD40基因5’-非翻譯區(qū)域-1C／T基因多態(tài)性，進(jìn)一步分析慢性乙型肝炎患者CD40基因型與sCD40水平的關(guān)系。 結(jié)果：慢性乙型肝炎組sCD40(54.41±37.97)pg／ml較正常對(duì)照組(35.4±15.82)pg／ml顯著升高。CD40各基因型之間血清sCD40水平差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：慢乙肝病人高表達(dá)sCD40可能參與了肝細(xì)胞的損害及抗病毒免疫