松材線蟲(chóng)的人工飼養(yǎng)和RNA干擾研究.pdf

1、松材線蟲(chóng)(Bursaphelenchus xylophilus)病是松樹(shù)上的一種毀滅性病害,具有危害性大、傳播速度快、防治難度大等特點(diǎn),是世界性檢疫對(duì)象。前人對(duì)松材線蟲(chóng)病的病源、敏病機(jī)理以及防治技術(shù)進(jìn)行了大量的研究。自發(fā)現(xiàn)松材線蟲(chóng)病起,國(guó)內(nèi)外投入了大量的人力、物力和財(cái)力來(lái)防治該病,但該病到目前為止還沒(méi)有得到有效控制,且仍有繼續(xù)蔓延的趨勢(shì)。 本研究在前人研究的基礎(chǔ)上就松材線蟲(chóng)簡(jiǎn)便有效人工飼養(yǎng)方法的建立和利用RNA干擾技術(shù)抑制松材線

2、蟲(chóng)的繁殖進(jìn)行了初步研究,結(jié)果表明： 1.50條松材線蟲(chóng)在培養(yǎng)9天后就進(jìn)入了大量繁殖的指數(shù)生長(zhǎng)期,培養(yǎng)10天松材線蟲(chóng)的數(shù)量可擴(kuò)大300倍,培養(yǎng)15天數(shù)量可擴(kuò)大數(shù)千倍。 2.在傳統(tǒng)形態(tài)分類上,松材線蟲(chóng)和擬松材線蟲(chóng)主要依靠雌成蟲(chóng)的尾部特征來(lái)區(qū)分,幼蟲(chóng)則較難鑒定。本實(shí)驗(yàn)根掘兩者在ITS-1區(qū)的細(xì)小差別設(shè)計(jì)了引物,PCR反應(yīng)后電泳,用SF+R引物能出現(xiàn)約340bp長(zhǎng)度目的條帶的就是松材線蟲(chóng),而用NF+R引物有目的條帶的為擬松材線蟲(chóng)

3、,這樣就可以準(zhǔn)確地區(qū)分兩個(gè)形態(tài)特征很相似的近緣種。 3.松材線蟲(chóng)的單異活體培養(yǎng)不但操作簡(jiǎn)單,而且產(chǎn)量比較高。采用PDA平板培養(yǎng)狄葡萄孢,待狄葡萄孢鋪滿平板后接種松材線蟲(chóng),25℃恒溫培養(yǎng)15天,然后漏斗收集是簡(jiǎn)便有效的松材線蟲(chóng)人工飼養(yǎng)方法。 4.利用不同物種間關(guān)鍵基因的高度保守性,從秀麗隱桿線蟲(chóng)RNA聚合酶基因出發(fā)克降了松材線蟲(chóng)RNA聚合酶基因片段,同時(shí)選用了帶雙啟動(dòng)子的載體LITUMS38i,成功構(gòu)建了能表達(dá)雙鏈目的片段